Információ

Hány mutált gén egy komplementációs tesztből?

Hány mutált gén egy komplementációs tesztből?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ha az 1, 3 és 5 együtt hibás, ez azt jelenti, hogy ugyanazon a génen vannak. A 3-as és az 5-ös együtt is hibás, vagyis ugyanazon a génen vannak, mint az 1. Miért mondja ez a dia, hogy 3 mutált gén van? Biztos hiányzik valami, azt hiszem, valamit nem értek.


Ebben a komplementációs tesztben 5 mutációt tesztelnek.

Az első gén a 2-es számú mutációt hordozza. Más szavakkal, a 2-es mutáció kiegészíti az 1-es, 3-as, 4-es és 5-ös mutációkat, és nem képes önmagát kiegészíteni.

A második gén a 4-es számú mutációt hordozza. Más szavakkal, a 4-es számú mutáció kiegészíti az 1-es, 2-es, 3-as és 5-ös mutációt, és nem képes önmagát kiegészíteni.

A három gén közül a harmadik az 1. mutációt hordozza az egyik törzsben, a 3. mutációt egy második törzsben, és az 5. mutációt egy harmadik törzsben. Más szavakkal, az 1-es, 3-as és 5-ös mutáció nem komplementálja egymást, de mindhárom komplementer mutáció 2 és 4.

Ebben a kísérletben 5 különböző törzs szerepel, és öt különböző mutáció van (minden törzsben egy), de az öt mutáció csak három különböző gént érint.


BSCI410

Vad típusú allél (vad típusú): 1%-nál nagyobb allélgyakoriság.
Monomorf gén - csak egy vad típusú allél.
Polimorf gén - több vad típusú allél (pl. ABO vércsoportok.

Hogyan befolyásolják a DNS változásai a fenotípust?

A termelt normál fehérje mennyiségének változása
Változások az aminosav sorrendben.

A legtöbb mutáció semleges, különösen az eukarióták esetében, mivel a DNS nagy része nincs génben, és így nem befolyásolja a szervezet fenotípusát.

Csíramutáció – az ivarsejtekben (petékben és spermiumokban) fordul elő, és átadódik az utódoknak

Kromoszómamutáció - kromoszóma szinten fordul elő (több gént érint)

Génmutáció - génszinten fordul elő (egy gént érint)

Forward mutáció – a vad típust más alléllá változtatja
Reverz mutáció – az új mutáció vad típusúvá való visszaállását okozza (reverzió ritkább)

- Down-szindróma - Triszómia 21

-Turner-szindróma - egyetlen X kromoszóma

1. "Átmenetek", ahol az egyik purint egy másik purinra cseréljük (A <-> G), vagy egy pirimidint egy másik pirimidinre (T<-> C).

-A nagyobb mutációk teljesen új szekvenciák beépülését foglalják magukban, gyakran a DNS-ben lévő transzponálható elemek mozgása vagy kromoszómaváltozások, például inverzió vagy transzlokáció miatt.

-A trinukleotid ismétlődések DNS-replikációjának elcsúszása okozza. A replikáció során a DNS-polimeráz „dadoghat”, amikor egy rövid szekvencia több tandem másolatát replikálja.

pl.: . Például a CAGCAGCAGCAG, a CAG 4 kópiája, esetenként 3 vagy 5 kópiává alakul DNS polimeráz dadogással.

A géneken kívül ez a hatás hasznos genetikai markereket, úgynevezett SSR-t (egyszerű szekvencia ismétlődéseket) termel.

- Az FMR-1 gének a nem érintett emberekben kevesebb mint 50 CGG ismétlődést tartalmaznak.

- Az instabil premutációs allélok 50 és 200 között ismétlődnek.

- A kópiaszám változásának sebessége sokkal nagyobb HD emberekben - a túl sok másolat miatt az ismétlődő szekvencia jobban ki van téve a DNS polimeráz dadogásának a meiózis során


Mutáns elemzés

A mutáns organizmusok hatékony eszközöket biztosítanak az élő sejtek biokémiai útvonalainak tanulmányozására. Ebben a félévben olyan élesztőtörzsekkel dolgozunk, amelyek nem képesek metionint (Met) vagy ciszteint (Cys) szintetizálni, mert a bioszintetikus útvonalban résztvevő gének egyike inaktiválódott. A Met és a Cys esszenciális aminosavak minden szervezet számára. Az oldalláncukban lévő kénatomok jellegzetes kémiát kölcsönöznek a Metnek és Cysnak, aminek fontos következményei vannak
a fehérje működéséhez. Ellentétben velünk, a vad típusú élesztő képes a Met-et és a Cys-t is szintetizálni, kénforrásként csak szervetlen szulfátot használva. Az ebben a félévben használt mutáns törzsek mindegyikéből hiányzik egy TALÁLKOZOTT gén, és ez a deléció megakadályozza, hogy a törzs olyan táptalajokon növekedjen, amelyek kénforrásként csak szulfátot tartalmaznak. A törölt TALÁLKOZOTT a törzsekben lévő géneket homológ rekombinációval bakteriális kanamicin rezisztencia (KAN R) génre cserélték (Winzeler és mtsai., 1999). A pontosságtól függően találkozott mutáció esetén a törzsek képesek lehetnek Met és Cys szintetizálására más kénforrásokból, amelyeket a sejtbe szállítanak és átalakítanak
Metnek vagy Cysnek. Ebben a laborban különböző kénforrásokat tartalmazó szelektív táptalajokat és differenciális táptalajokat fog használni a három talált mutáns megkülönböztetésére. A következő laborban a polimeráz láncreakciót (PCR) fogja használni a mutáns met törzsek pontosabb azonosítására.

Genetikai nómenklatúra

Amikor génekre és törzsekre hivatkozunk, fontos a helyes genetikai nómenklatúra használata. A jelentések elkészítésekor ügyeljen a dőlt és a nagybetűkre. A génnevek dőlt betűvel vannak szedve, míg a fehérjékre és a fenotípusokra normál betűtípussal hivatkozunk. A nagybetűvel kezdődő génnevek domináns allélekre, míg a kisbetűkkel kezdődő génnevek recesszív allélekre utalnak. (Egy furcsaság a bimbózó élesztőről: S. cerevisiae A génnevek abban egyediek, hogy a domináns allélokat három nagybetűvel írják le. A legtöbb más eukarióta fajban a domináns allélokat úgy emlegetik Met6 csak az első betűt nagybetűvel.) S. cerevisiae A génnevek három betűből állnak, amelyeket egy szám követ. Sok különböző génnév lehet, amelyek ugyanazzal a három betűvel kezdődnek, pl. több mint 20 féle van TALÁLKOZOTT gének, de a génnév végén lévő szám egy adott génre jellemző. Ha egy adott mutáns allél esetében rendelkezésre áll bizonyos molekuláris részlet, a számot kötőjel követheti, és további információ áll rendelkezésre az allélról.

Példaként nézzük meg a nómenklatúrát, amelyet a MET6 géntől S. cerevisiae. A met előtagot a mutáns törzsekben található funkcióvesztési allélok leírására használják, amelyek többségét genetikai szűrések során izolálták, mivel nem képesek Met hiányában élni. A génekhez kapcsolódó számok általában tetszőlegesek. Az MET6 A gén azelőtt kapta a nevét, hogy géntermékét homocisztein-metiltranszferázként azonosították volna, ami a metioninszintézis utolsó lépése. Az alábbi lista a kapcsolódó gének, fehérjék és törzsek elnevezési konvencióit írja le S. cerevisiae MET6. Ugyanezek a szabályok vonatkoznak más génekre is S. cerevisiae.

  • MET6 — Domináns allél a MET6 gén vagy a kromoszóma lókusz
  • met6 — A recesszív allél a MET6 gén (met6 mutánsban található allél)
  • met6-12 — Recesszív allél – a zárójel utáni szám konkrét mutációra utal
  • met6-∆1 — Recesszív allél – met6 az allél specifikus delécióval rendelkezik (a ∆ deléciót jelöl)
  • met6::LEU2 — Recesszív allél – egy domináns LEU2 gén beépítése a kromoszómán lévő MET6 lókuszba inaktiválta a gazdaszervezet MET6 génjét
  • Met6p — A MET6 gén, azaz a homocisztein-metiltranszferáz által kódolt fehérje

Ezen a tanfolyamon haploid élesztőtörzsekkel fogunk dolgozni. Egy adott törzs genotípusának megírásához kezdje a párosodási típussal, és kövesse azt a törzs mutáns alléljeivel. Például olyan met törzseket használunk, amelyeket bakteriális kanamicin rezisztencia beiktatásával hoztunk létre (KANR) gént a BY4742 élesztőtörzsbe, amely α párosodási típussal rendelkezik, és mutációkat hordoz a hisztidin, leucin, lizin és uracil szintézisében részt vevő génekben. A BY4742 az S288C törzsből származik, amelyet a genomprojektben használtak (Brachmann et al., 1998). Így a genotípus a mi met6 A mutáns tartalmazná a BY4742 mutációkat, és a következőképpen írható:

MATa his3-∆1 leu2∆0 lys2∆0 ura3∆0 met6::KANR

Auxotrófok és szelektív táptalajok

Az találkozott A mutánsok Met-auxotrófok, ami azt jelenti, hogy nem képesek növekedni olyan tápközegben, amely nem tartalmaz Met-et. Az auxotrófok olyan mikroorganizmusok, amelyek egy génmutáció miatt nem képesek szintetizálni egy alapvető tápanyagot. Számos laboratóriumi törzs több mutációt hordoz, amelyek megzavarják az alapvető tápanyagok szintézisét. Például azért, mert a BY4742 törzs mutációkat hordoz a HIS3, LEU2, LYS2 és URA3 gének esetén a törzs csak hisztidint, leucint, lizint és uracilt tartalmazó tápközegben fog növekedni. Az auxotróf törzseknek sokféle felhasználása van a genetikában. A kutatók gyakran használnak auxotróf törzseket gazdaszervezetként a plazmidtranszformációhoz (12. fejezet). A transzformációhoz használt plazmidok a gazdatörzsben hibás gén funkcionális alléljait hordozzák, lehetővé téve a transzformánsok kiválasztását azon képességük alapján, hogy az esszenciális tápanyagot nélkülöző táptalajokon képesek növekedni.

*Az YNB vitaminok, ásványi anyagok és sók összetett keveréke. Végső koncentrációk YC-ben: Vitaminok (μg/liter): biotin (2), kalcium-pantotenát (400), folsav (2), inozit (2000), niacin (400), p-amino-benzoesav (200), piridoxin-hidroklorid (400), riboflavin (200) tiamin-hidroklorid (400). Ásványok (μg/liter): bórsav (500), réz-szulfát (40), kálium-jodid (100), vas-klorid (200), mangán-szulfát (400), nátrium-molibdát (200), cink-szulfát (400). Sók (mg/liter): egybázisú kálium-foszfát (1000), magnézium-szulfát (500), nátrium-klorid (100), kalcium-klorid (100). Forrás: Gottschling Lab

A szintetikus táptalajok nélkülözhetetlen eszközei az auxotrófok tenyésztésének és tanulmányozásának, mivel minden komponens meghatározott. Az élesztőkutatók számos különféle készítményt fejlesztettek ki szintetikus közegekhez. Minden szintetikus közeg tartalmaz szénforrást (általában D-glükózt), nitrogénforrást, valamint alapvető vitaminokat és ásványi anyagokat. A vitaminokat és ásványi anyagokat általában megvásárolják
élesztő nitrogénbázisként (YNB) ismert készítményben. A szintetikus tápközeghez adott kiegészítők testreszabhatók bizonyos genotípusok növekedésének támogatására vagy szelektálásra. Ezen a tanfolyamon Yeast Complete (YC) táptalajt fogunk használni, amely támogatja a legtöbb növekedését S. cerevisiae törzsek. A vad típusú törzsek növekedési üteme YC-ben valamivel lassabb, mint a gazdag tápközegben, például az YPD-ben, de a törzsek hosszú ideig életképesek. Az alábbi táblázat az YC összetételét mutatja, amely gazdag aminosavakat és nukleotidbázisokat tartalmaz. A teljes YC közeg mellett szelektív médiát is használunk, amelyből néhány komponens kimaradt. Például ebben a laborban YC-Met „kieső” médiát fogunk használni, amely a metionin kivételével a következő táblázatban szereplő összes YC összetevőt tartalmazza.

A metionin bioszintézisének genetikai elemzése

A fejezet későbbi részében a Met-bioszintézis útját tekintve elgondolkodhat azon, hogy a génszámok hogyan kapcsolódnak bizonyos génekhez, mivel a számok nem egyeznek meg a gén által kódolt reakciók helyzetével. TALÁLKOZOTT géntermékek az útvonalon. A számozási rendszer a MET gének felfedezési folyamatát tükrözi. Az élesztőben a Met-bioszintézissel kapcsolatos első tanulmányokat genetikusok végezték, akik klasszikus genetikai szűréseket használtak az izolálásra. találkozott mutánsok. A genetikai szűrések fontos eszközök az új gének azonosításában, mivel elfogulatlanok az útvonal előzetes ismeretei alapján. Ezenkívül a mutáció egy véletlenszerű folyamat, amelynek ki kell hatnia a vizsgált fenotípus előállításában részt vevő összes génre. A genetikus azzal kezdi, hogy a szülő törzset vegyszerrel vagy sugárzással kezeli, hogy mutációkat indukáljon a DNS-ben. Az élesztőben a spontán mutációs ráta az

10 -8 /bázis/generáció, ami túl alacsony egy gyakorlati genetikai szűréshez. A nyomozók ezért olyan mutagén dózisokat alkalmaznak, amelyek akár halált okoznak

a sejtek 50%-a. A mutagenezist túlélő sejtek jellemzően nagyszámú mutációt tartalmaznak, amelyek közül sok nincs hatással a vizsgált fenotípusra. Következésképpen nagyszámú sejtre van szükség a fenotípusban szerepet játszó összes gén feltárásához. Például az élesztő genomja tartalmaz

6000 gén, tehát egy hasznos genetikai szűrés 20 000 vagy több sejtet is magában foglalhat.

A szelektív táptalajok fontos eszközöket biztosítanak a mutáns fenotípusok azonosításához genetikai szűrésekben. A vizsgált fenotípustól függően a kutatók pozitív vagy negatív szelekciós sémával is kiválaszthatják a mutánsokat, amint az a másik oldalon látható. A legegyszerűbb szűrések pozitív szelekciót alkalmaznak, mivel csak a mutáns sejtek nőnek szelektív táptalajon. Ha a kutatók olyan utakat elemeznek, amelyek fontosak a sejtnövekedés szempontjából, mint például a Met szintézis, akkor valószínűleg negatív szelekciós sémát alkalmaznának. A negatív sémában a sejteket először olyan tápközegen tenyésztik, mint például YPD vagy YC, amely lehetővé teszi az összes sejt növekedését. Ezeknek a mesterlemezeknek a replikái ezután meghatározott, Met hiányos adathordozón készülnek. Mivel a Met-t nem tartalmazó szelektív táptalajokon csak vad típusú sejtek nőnek, a kutatók olyan telepeket keresnek a gazdag táptalajon, amelyek megfelelői hiányoznak a szelektív táptalajból.

Élesztőmutánsok izolálására használt szelekciós stratégiák. A kezdeti mutagenezis után az élesztőt gazdag (vagy teljes szintetikus) tápközeget tartalmazó lemezen növesztjük. Ezen az ábrán a mutagenezis három különböző mutánst hozott létre a kérdéses génben. A mutáns telepeket üres kör veszi körül. A főlemez másolatait a rendszer szelektív adathordozóra másolja. Negatív szelekciós sémában a szelektív lemezből hiányzik egy olyan komponens, amely normálisan jelen van a gazdag tápközegben. Pozitív szelekciós sémában a táptalaj szelektív szert tartalmaz, amely toxikus a normál sejtekre, de a mutáns sejtek tolerálják. A szelektív szer néha egy normál celluláris metabolit toxikus analógja.

A genetikai szűréssel nyert mutánsok száma és spektruma a mutáció véletlenszerű természete miatt megjósolhatatlan. Ahogy az várható is, egy szűrés több mutánst is termelhet egy génben, és nem mutációkat a fenotípusban részt vevő többi génben.
A szűrés befejezése után a kutatóknak meg kell határozniuk, hogy a mutációk ugyanazon vagy különböző génekben vannak-e. Ehhez a genetikusok a genetikai térképezésre és/vagy komplementációra támaszkodnak. A komplementáció a génaktivitás funkcionális tesztje. Egy komplementációs kísérletben egy másik forrásból származó funkcionális gén bevezetése megmenti a hibás gén által okozott mutáns fenotípust. Az élesztőben végzett klasszikus genetikai komplementáció kihasználja a két élesztőpárosodási típust és az élesztő azon képességét, hogy haploid és diploid törzsként is túléljen. A met mutánsokkal végzett komplementációs kísérletben a kutatók egy haploid met mutánst párosítottak vagy az α-ban, ill a párzási típus (MATα vagy MATa) haploiddal találkozott ellenkező párosodási típusú mutáns. Ha a diploid képes növekedni Met hiányában, komplementáció történt, és a találkozott a két haploid törzs mutációinak különböző génekben kell lenniük. Ha a diploid nem képes túlélni a szelektív lemezen, a két haploid törzs mutációkat hordoz ugyanabban a génben (bár szinte biztos, hogy különböző mutáns allélokról van szó). Egy genetikai szűrés ugyanannak a génnek több mutáns alléljét eredményezhet, amelyek együtt komplementációs csoportot alkotnak.

1975-re az élesztőlaboratóriumok izolált gyűjteményekkel rendelkeztek találkozott mutánsokat és kilencet térképezett fel találkozott kromoszómák mutációi. Egy mérföldkőnek számító tanulmányban Masselot és DeRobichon-Szulmajster (1975) 100 találkozott törzsek laboratóriumaiból szerte a világon, és szisztematikus komplementációs kísérleteket végeztek az összes mutánssal. Huszonegy komplementációs csoportot azonosítottak, amelyek potenciális géneket képviselnek, és a géneket elnevezték. MET1 keresztül MET25. Sok a TALÁLKOZOTT gének enzimeket kódolnak a Met bioszintetikus útvonalon, amelyet a másik oldalon vázolunk fel. Egyes géntermékek részt vesznek a folyamatban használt kofaktorok és metildonorok szintézisében, míg mások TALÁLKOZOTT géntermékek (nincs ábrázolva) részt vesznek az útvonal szabályozásában (lásd Thomas & Surdin-Kerjan, 1992). Többnyire az 1975-ös tanulmányban megadott neveket ma is használják. Az 1975-ös tanulmányban azonosított néhány génről később kiderült, hogy nem vesznek részt a Met bioszintézisében, mások pedig (pl. MET15, MET17 és MET25) később kimutatták, hogy ugyanazon gén különböző alléljeit képviselik (D’Andrea et al., 1987).

Az 1975-ös tanulmány idején a folyamatban zajló biokémiai reakciók nagyrészt ismertek voltak, és a tudósok azzal a kihívással szembesültek, hogy a géneket enzimatikus tevékenységekkel társítsák. Az útvonalból láthatja, hogy a mutációk 11 különböző TALÁLKOZOTT gének olyan fenotípust hoznának létre, amelyben a törzsek metionin jelenlétében növekednének, de hiányában nem. A tudósok leszűkítették a lehetséges gén-enzim kapcsolatokat azáltal, hogy elemezték a talált törzsek azon képességét, hogy alternatív kénforrásokat használjanak a metionin helyett (Masselot & DeRobichon-Szulmajster, 1975). Az élesztő nagyon sokoldalúan felhasználja mind a szervetlen, mind a szerves kénforrásokat. A szulfátot a membránban található Sul1p és Sul2p transzporterek hatékonyan szállítják a sejtekbe. A szulfit és a szulfid is csökkentett hatékonysággal kerül a sejtekbe. Az élesztő kénforrásként képes a Met, Cys, homocisztein és S-adenozil-metionin (AdoMet vagy SAM) szállítására és felhasználására is (lásd Thomas és Surdin-Kerjan, 1992). Ebben a laborban szelektív tápközeget fog használni, amelyben a szulfit vagy cisztein helyettesíti a metionint, hogy megkülönböztesse a 3. találkozott mutánsok. Használjon differenciális táptalajt is, a BiGGY agart, amely megkülönbözteti az élesztőtörzseket hidrogén-szulfid-termelésük alapján. A differenciális táptalaj lehetővé teszi az összes mutáns növekedését, de a mutánsok olyan telepeket hoznak létre, amelyek színük vagy morfológiájuk alapján megkülönböztethetők egymástól.

JEGYZET: Az találkozott A kurzusban használt mutánsok NEM hagyományos mutagenezissel jöttek létre. Ehelyett a mutánsokat egy újabb molekuláris megközelítéssel hozták létre, amely az élesztő genomszekvenciájának részletes ismeretét igényli. Miután az élesztő genom projekt befejeződött, a kutatók a deléciós törzsek genomra kiterjedő gyűjteményének beszerzése iránt érdeklődtek, amelyek mindegyike egyetlen génlókuszban különbözik a szülői BY4742 törzstől. Megközelítésük, amely
fejezetben részletesebben tárgyaljuk, kihasználja a magas frekvenciát, amellyel S. cerevisiae homológ rekombináción megy keresztül. Minden ORF a S. cerevisiae genomot szisztematikusan bakteriálisra cserélték KAN R gén (Winzeler et al., 1999). Ennek a stratégiának, amelyet néha „fordított genetikának” is neveznek, a hagyományos genetikai megközelítéssel szemben az a fő előnye, hogy a pozitív szelekció felhasználható mutánsok izolálására. Csak törzsek megszakadt TALÁLKOZOTT gének képesek szaporodni kanamicin analógokat tartalmazó tápközegen. Törzsek a KAN R -a zavart gének más előnyökkel is rendelkeznek a kémiai mutagénekkel vagy sugárkezeléssel előállított mutáns törzsekkel szemben. A törzsek nem tartalmaznak a mutagén kezelés által kiváltott másodlagos mutációkat, és a vad típusú fenotípusba való spontán visszaállás nem lehetséges.

Metionin bioszintézis élesztőben. A Met és Cys bioszintézis egyes lépéseit katalizáló fehérjék az útvonal minden lépése mellett vannak felsorolva. Az aktivitásokat kódoló gének nevei dőlt betűkkel vannak feltüntetve, a S. cerevisiae konvencióit követve. A MET1 és MET8 gének olyan fehérjéket kódolnak, amelyek részt vesznek a szirohem szintézisében, amely a szulfitreduktáz nélkülözhetetlen kofaktora. A MET7 és MET13 géntermékek katalizálják a Met6p által használt metildonor, a homocisztein-metiltranszferáz szintézisének utolsó két lépését a metionin szintézisére. (Thomas et al., 1992-ből átdolgozva)

A kén aminosavak biokémiája

S. cerevisiae életéhez három kéntartalmú aminosav szükséges. A sejtfehérjékbe beépült Met és Cys mellett a sejteknek S-adenozil-metioninra (AdoMet) is szükségük van, amely számos metilációs reakcióhoz aktivált metilcsoportokat biztosít. Az előző oldalon e három aminosav szintézisének konszenzusos nézetét számos laboratórium biokémiai és genetikai bizonyítékai jól alátámasztják (lásd Thomas
& Surdin-Kerjan, 1992). A gén-enzim kapcsolatokat nem tudták véglegesen megállapítani a molekuláris klónozási és DNS-szekvenálási technikák kifejlesztéséig, amelyek lehetővé tették a kutatók számára, hogy plazmid komplementációt alkalmazzanak a génműködés közvetlen tesztelésére. Ezekben a kísérletekben a kutatók vad típusú plazmidokat állítottak elő MET, CYS vagy SAM gének, amelyeket mutáns törzsekké transzformáltak. A transzformált törzsek csak akkor voltak képesek túlélni, ha a plazmid a mutánsban az inaktivált gén vad típusú allélját tartalmazta. (Ebben az osztályban a plazmid komplementációt fogja használni a törzsek és plazmidok azonosításának megerősítésére.)

A legtöbb gének, amelyekkel ebben a szemeszterben dolgozunk, olyan enzimeket kódolnak, amelyek katalizálják az egyik kéntartalmú molekula egy második kéntartalmú molekulává való átalakulását. Egyéb TALÁLKOZOTT gének olyan enzimeket kódolnak, amelyek közvetlenül nem vesznek részt a kén-aminosavak szintézisében, de katalizálják a kén-aminosavak szintéziséhez szükséges kofaktor vagy metil-donor szintézisét. Az alábbi rövid leírásban követni fogjuk a kénatom fejlődését szervetlen szulfátból Met-vé, Cys-vé vagy AdoMetté.

A szulfát asszimiláció magában foglalja a kén aktiválását és szulfiddá redukcióját

A szulfát szulfiddá alakulásában részt vevő reakciókat magában foglaló folyamat korai lépései a szulfát asszimilációs útvonalat foglalják magukban. A szulfátionok a legtöbb kén forrása a biológiai molekulákban, de jelentős anyagcsere-energiára van szükség ahhoz, hogy a szulfátot +6 oxidációs állapotából aktiválják, és -2 oxidációs állapotú szulfiddá alakítsák. A szulfát-asszimilációért felelős enzimek széles körben elterjedtek a mikroorganizmusokban és a növényekben. Ban ben S. cerevisiaeA szulfátot először az ATP-szulfuriláz vagy a Met3p aktiválja, és 5’-adenil-szulfátot (APS) hoz létre. Az APS-t ezután a Met14p vagy APS-kináz foszforilezi, és 3'-foszfo-5'-adenil-szulfátot (PAPS) képez. A PAPS egy érdekes molekula, mivel egy aktivált kénatomot tartalmaz, amely számos kénátviteli reakcióhoz felhasználható. Emlősökben a PAPS-t számos szulfatációs reakcióhoz használják a Golgi-ban, ahol az akceptorok közé tartoznak a lipidek, fehérjék és különféle kis molekulák. (Érdekes módon az APS kináz az egyetlen élesztő enzim, amely részt vesz a szulfát homológokkal történő asszimilációjában emlősökben.)

A szulfát asszimiláció utolsó két lépése a NADPH-függő redukciós reakció. A PAPS reduktáz vagy Met16p katalizálja az első reakciót, amely két elektront ad a kénatomhoz. A végső 6-elektronos redukciót a szulfit-reduktáz katalizálja. A szulfit-reduktáz egy összetett metalloenzim, amely két Met5p és két Met10p alegységet, valamint több protéziscsoportot, köztük a sirohémet tartalmaz, amelyek részt vesznek az elektronátvitelben. (A protéziscsoport olyan fémion vagy szerves molekula, amely kovalensen kötődik egy enzimhez, és elengedhetetlen az aktivitásához.) Élesztőben a sirohém a Met1p és Met8p által katalizált reakciósorozat során szintetizálódik.

A Sirohem szintézist formálisan nem tekintik a szulfát asszimilációs folyamat részének, de funkciója kritikus a funkcionális szulfitreduktáz összeállításában.

Homocisztein szintézis és transzszulfuráció

A Met és Cys bioszintézis következő lépésében a szulfid beépül a homocisztein (Hcy) aminosavba. A Hcy az élesztőben több útvonal közötti elágazási ponton ül. A Hcy aminosav gerince végső soron az aszparaginsavból származik, amelyet egy sor lépésben homoszerinné alakítottak át. (Megjegyzés: a „homo” aminosavak oldalláncaiban extra szénatom van, mint az előtag nélküli névrokonok.) A Met2p aktiválja a homoszerint egy acetilezési reakcióban, amely acetil-CoA-t használ. A Met17p, más néven homocisztein-szintáz vagy O-acetil-homoszerin-szulfhidiáz, ezután katalizálja az O-acetil-homoszerin és a szulfid reakcióját, és Hcy-t képez.

Az élesztőben a Hcy a Cys vagy a Met prekurzoraként szolgál. A Hcy-t és a Cys-t összekötő útvonalat transzszulfurációs útvonalnak nevezik. A transzszulfuráció biztosítja S. cerevisiae szokatlan rugalmassággal a kénforrások tekintetében. Négy különböző géntermék vesz részt a Hcy Cys-vé történő átalakulásában és fordítva, a cisztationint (lent) használva közös köztitermékként. Az Str2p katalizálja a cisztationinszintézist a Cys-ből és az O-acetil-homoszerinből, amely a Met2p által katalizált reakció terméke. Az ellenkező úton a Cys4p (más néven Str4p) katalizálja a Hcy és Ser cisztationin szintézisét. A kénátviteli útvonal négy génje az evolúciós konzerváció különböző mintáit mutatja. Például, E. coli nem képes szintetizálni a Cys-t a Met-ből, míg az emlősök nem képesek szintetizálni a Met-t Cys-ből.

A metionin és az AdoMet a metilciklus során képződik

A Hcy egyben a Met és AdoMet előállítását végző ciklus kiindulópontja is. A ciklus akkor kezdődik, amikor a Met6p katalizálja a Hcy átalakulását Met-vé, egy szokatlan metil-donor, a poliglutamil-5-metil-tetrahidrofolát (THF) felhasználásával. Az MET13 és MET7 gének kódolják azokat az enzimeket, amelyek a poliglutamil-5-metil-THF szintézisének utolsó két lépését katalizálják, ami a met7 és met13 sejtek metioninszintézisére való képtelenségéért felelős.

Ahogy az várható volt, a metionin nagy részét a sejtekben a fehérjeszintézishez használják, de jelentős mennyiséget nagy energiájú metil-donorrá, az AdoMet-vé alakítanak át két közel azonos AdoMet szintáz, a Sam1p és a Sam2p. A S. cerevisiae nagy mennyiségű AdoMet szintetizálására képes, amelyet vagy transzmetilációs reakciókhoz használnak fel, vagy a vakuólumában tárolják. (Valójában az élesztő a legtöbb kereskedelemben előállított AdoMet forrása.) Több élesztő metil-transzferáz katalizálja a metilcsoportok átvitelét az AdoMet-ről több száz különböző szubsztrátumra, amelyek között megtalálhatók a DNS-ben és RNS-ben található nukleotidbázisok és cukrok, valamint különböző aminosav-oldalláncok. fehérjék, lipidek, kis molekulák stb. Minden transzmetilációs reakció egy S-adenozil-homocisztein (AdoHcy) molekulát hoz létre, amelyet a Sah1p adenozinná és Hcy-vé hidrolizál, befejezve a metilciklust.

Ebben az osztályban nem vizsgáljuk a metilciklusban részt vevő enzimeket, de fontos megérteni a sejtek túlélésében betöltött fontosságukat. A Sam1p és a Sam2p aminosavszekvenciája 93%-ban azonos, ami jóval magasabb, mint más fehérjéké, amelyek génduplikáció során keletkeztek. S. cerevisiae. Ez a redundancia puffert biztosít bármelyik funkció elvesztése ellen. A mutációval rendelkező sejtek akár a SAM1 vagy SAM2 gén túlélni képes, de a mindkét génben mutációt tartalmazó sejtek nem képesek túlélni. Hasonlóképpen a SAH1 gén egyike azon kevés esszenciális géneknek S. cerevisiae, valószínűleg azért, mert az AdoHcy felhalmozódása számos metiltranszferáz reakciót gátolna.

A mutációk megzavarják a biokémiai utakat

Az találkozott az Ön által elemzett mutánsok nem képesek katalizálni a kén aminosav szintéziséhez szükséges reakciók egyikét. Ebben a laborban szelektív és differenciális táptalajokat fog használni annak meghatározására, hogy mely géneket inaktiválták az Ön törzsében. Gondoljon úgy, hogy minden mutáció kitörli a kén aminosav útvonalon látható nyilak egyikét. Szelektív közegeink sokféle kénforrást tartalmaznak. A talált mutáció kénforráshoz viszonyított helyzetétől függően a törzs képes vagy nem képes szintetizálni a kén aminosavakat.

Ezenkívül a BiGGY agar differenciál táptalajt fogja használni az élesztőtörzsek megkülönböztetésére az általuk termelt hidrogén-szulfid mennyisége alapján. Ennek az az oka, hogy a BiGGY bizmutot tartalmaz, amely reakcióba lép a szulfiddal, és barnás-fekete csapadékot képez. A BiGGY-n várhatóan minden törzs növekedni fog, mivel élesztőkivonatot tartalmaz, amely metioninforrás. A BiGGY elsődleges kénforrásként szulfitot is tartalmaz, nem szulfátot. Keresse meg a mutált génjeit az útvonalon a szulfidhoz és a szulfithoz képest. A szulfid előtti gének mutációinak könnyebb kolóniákat kell eredményezniük, mivel kevesebb szulfid keletkezik. Ezek közül a szulfitredukciót megakadályozó mutációknak kell a legkönnyebb kolóniákat létrehozniuk. A szulfid utáni gének mutációinak sötétebb telepeket kell létrehozniuk, mivel a törzsek nem lesznek képesek a szulfidot metabolizálni.

A kísérletre vonatkozó jóslatok elkészítésekor hasznosnak találhatja ezt a hasonlatot: Az anyagcsere-útvonal nem különbözik az egyirányú (energetikai megfontolások miatt a legtöbb anyagcsereút egyirányú) autópályától, amelyen egy sor híd köt össze szigeteket. (A szigetek energiaszintje eltérő.) Az autópályán haladó autók azok a molekulák, amelyek egyik formából a másikba alakulnak át. Amikor egy autó eléri az útvonal következő szigetét, megváltozik a színe, mert egy másik molekulává alakult át. A hidak az enzimek a folyamatban. Megkönnyítik az autók áthaladását, mert katalizálják azokat a reakciókat, amelyek az egyik molekulát a másikká alakítják. Ha egy mutáció történik egy bizonyos enzimet kódoló génben, az adott híd leesik. A letört híd előtt elkezdenek felhalmozódni az autók, és nagyon kevés autót találni a letört híd melletti szigeteken. Egyes esetekben létezhet alternatív útvonal vagy mentési útvonal, de ez általában kevésbé hatékony útvonal.


1. BEMUTATKOZÁS

A fitopatogén oomyceta Phytophthora sojae a szójabab gyökérrothadás betegségének kórokozója világszerte. A beteg növényekre jellemző a szójabab palánták vízzel átitatott pusztulása és csillapítása, ami évente 1-2 milliárd dolláros állománycsökkenést és hozamkiesést okoz (Kamoun et al., 2015 Tyler, 2007). A gazdasági hatása P. sojae, a rendelkezésre álló genom és transzkriptom adatok bőségével együtt alkalmas modellfajtává teszi a petegomba növényi kórokozók vizsgálatához (Tyler, 2007 Ye et al., 2011).

Omycetesben a gén-célzó transzgenezist jellemzően transzkripciós szintű szabályozással, internukleáris géncsendesítés útján hajtják végre (van West et al., 1999, 2008). A géncsendesítésen alapuló manipuláció azonban instabil és nem hatékony. A homológ rekombinációt széles körben alkalmazták a fajok géncseréjére a királyságokban, de ez a megközelítés nem működött jól a CRISPR/Cas9 rendszer létrehozása előtt. A közelmúltban a CRISPR/Cas9 bevonásával végzett genommódosítást néhány petegomba esetében hajtották végre (Fang & Tyler, 2016 Fang et al., 2017), ami jelentős technikai megvalósíthatóságot biztosít a petesejtek kutatásához. A CRISPR/Cas9 rendszer az adaptív immunválasz veleszületett összetevőjeként fejlődött ki bakteriális és régészeti rendszerekben, és ma már sokoldalú molekuláris eszközként használják, amely specifikus és célzott genommódosítást biztosít az eukarióták széles körében. Ennek a genomszerkesztő eszköztárnak az alkalmazásai közé tartoznak a célzott génmutációk és génpótlások, amelyek például serkentik a funkcionális genomikai vizsgálatokban rejlő potenciált az oomycetesben. P. sojae (Ma et al., 2017 Yang et al., 2017), Phytophthora capsici (Miao et al., 2018 Wang et al., 2018), Phytophthora palmivora (Gumtow et al., 2018), és Aphanomyces invadans (Majeed et al., 2018). Mindazonáltal ezeknek a precíziós célzott genomszerkesztő platformoknak a kiterjedt használata miatt még mindig van néhány probléma a szerkesztési technológiák hatékony felhasználásával oomycetesben.

Annak igazolására, hogy a mutáns fenotípus valóban egy adott gén hiányának köszönhető, a natív gént újra be kell juttatni a gént nem tartalmazó mutánsba. Ezt úgy lehet megtenni, hogy a gén egy másolatát visszahelyezzük egy plazmidba vagy a genom egy másik helyére (Choudhary et al., 2015 Zhou és mtsai, 2016), amely megközelítés alkalmazhatónak bizonyult oomycetesben (Qiu) et al., 2020). Ennek a megközelítésnek az az előnye, hogy csak egy plazmidra van szükség, és viszonylag könnyen expresszálható egy véletlenszerű helyre visszahelyezett gén. Hátránya, hogy a kromoszóma nem rokon részeinek transzkripciója az inszerció helyén befolyásolható (van Dam & Bos, 2012). Így a mutált gén pontos helyettesítésének képessége, a fenotípus-helyreállítás tesztelése nagyon kívánatos a funkcionális genomikai kutatás eléréséhez.

Ebben a tanulmányban in situ komplementációs módszert valósítottunk meg P. sojae protein-foszfatáz 2A szabályozó B-alegységét kódoló gén felhasználásával. A protein-foszfatáz 2A (PP2A) a széles körben konzervált szerin/treonin-foszfatázok alcsoportja, és sokrétű szerepet játszik a transzkripcióban, transzlációban, differenciálódásban, sejtciklusban és jelátvitelben (Mumby és Walter, 1993). A PP2A holoenzim szabályozó B-alegységét azonosítottuk P. sojae, az úgynevezett PsPP2Ab1, amely hasonlóságot mutat a CDC55-tel Saccharomyces cerevisiae (Healy et al., 1991). A CRISPR/Cas9 által közvetített génkiütést és az azt követő in situ génkomplementációt alkalmaztuk a micéliumnövekedésben, a sporangiumképződésben és a virulenciában játszott szerepének vizsgálatára. P. sojae. Eredményeink sikeres in situ komplementációt mutatnak be, és megismétlik a genomszerkesztés hozzáadott értékét a génfunkciók feltárásához Phytophthora.


Frissítés: Mutációk az emberi rákban a KRAS lencséjén keresztül

A szerzők javítása: Egy figyelmeztető olvasónk arról értesített bennünket, hogy a Broad Institute Genome Data Analysis Centerben található adatok azt mutatják, hogy a tüdő adenokarcinómáiban az EGFR gének valóban csak akkor mutáltak erősen, ha a KRAS vad típusú (0/66, mutáns/vad típusú). A szkriptünk nem tudta visszaadni ezt a torzítást a #DIV/0 miatt! hiba. Az alábbi szöveg, a 2A ábra és a táblázat javításra került.

2015-ben közzétettünk egy RAS-párbeszédet, amely a TCGA (The Cancer Genome Atlas) adatait felhasználva elemezte a rákban található KRAS-mutációk fajtáit, valamint azokat a géneket, amelyek gyakran komutáltak (KRAS-szal együtt mutáltak), gyakran kontramutáltak (mutáltak). amikor a KRAS vad típusú volt), vagy gyakran mutált, függetlenül a KRAS állapotától. Adatainkat a Broad Institute GDAC-jából (Genome Data Analysis Center) töltöttük le, és 122 hasnyálmirigyből (PAAD, pancreas ductalis adenocarcinoma), 226 tüdőből (LUAD, tüdő adenokarcinóma), 149 vastagbélből (COAD, colon adenocarcinoma) és 217 rektálisból állt. READ, rectum adenocarcinoma) minták, összesen 714 beteg daganatok.

Most megismételtük elemzésünket, kihasználva a nagyobb számú daganatmintát, amelyet a Broad GDAC-helyszínén, valamint a Memorial Sloan Ketteringben (cBioPortal) és az AACR Genie projektjén keresztül elemeztek. Ezenkívül a cBioPortal és a Genie adatok tartalmaznak egy kombinált kategóriát a vastag- és végbélmintákhoz (COADREAD). (Ez egy különálló mintakészlet, nem a vastagbél és a végbél kombinációja.) Ezen újabb adatok elemzése itt látható grafikus formában (Ábrák letöltése), itt pedig számszerű formában (Táblázat letöltése).

Kulcs a figurákhoz

  1. A 2015-ös évhez hasonlóan minden páciens daganatában színkóddal ábrázoltuk a jelentős géneket. Minden oszlop egy-egy beteg daganatát jelöli.
  2. Minden sor olyan gént jelöl, amely jelentősen mutált (lásd alább a Módszerek részt).
  3. A génneveket a következő séma szerint színezzük:
    1. A kék génnevek olyan géneket jelölnek, amelyek legalább négyszer nagyobb valószínűséggel mutálódnak, ha a KRAS mutáns.
    2. A vörös génnevek olyan géneket jelölnek, amelyek legalább négyszer nagyobb valószínűséggel mutálódnak, ha a KRAS vad típusú.
    3. A fekete génnevek olyan géneket jelölnek, amelyek a betegminták legalább 20%-ában mutáltak, függetlenül a KRAS állapotától.

    Eredmények

    Az elemzésre rendelkezésre álló betegminták száma jóval nagyobb, mint 2015-ben, összesen 20 503 daganatmintát. A három forrásból származó adatokat olyan génekre elemezték, amelyek mutáltak a páciens tumormintáiban, amikor a KRAS-gének mutáltak vagy vad típusúak, valamint olyan génekre, amelyek erősen mutáltak, függetlenül a KRAS-mutáció állapotától. A hasnyálmirigy-, tüdő-, vastagbél-, végbél- és vastagbélrákok eredményei téglalapokból álló rácsként jelennek meg, amelyek az aminosav-változásokat jelzik az egyes daganatmintákban, és össze is vannak foglalva a Táblázatban. A mutáns KRAS arányát az egyes adatkészletekben az 1. táblázat mutatja be.

    1. táblázat: Az egyes típusú tumorminták száma és a mutáns KRAS gének aránya ezekben a mintákban.
    Minta típusa Széles GDAC MSK cBioPortal AACR Genie
    Minták száma (% mutáns KRAS)
    Hasnyálmirigy (PAAD) 184 (76%) 766 (89%) 1973 (90%)
    Tüdő (LUAD) 523 (31%) 890 (32%) 7429 (36%)
    Vastagbél (COAD) 347 (45%) 132 (38%) 3679 (44%)
    Rektális (READ) 121 (51%) 327 (45%) 1021 (44%)
    Kolorektális (COADREAD) --- 1378 (39%) 1733 (51%)

    Általános észrevételek a módszerről

    • Az egyes betegek adatainak megjelenítésére szolgáló színes rácsformátum kevésbé hasznos, mivel a betegek száma megnő, mert a rács négyzetei olyan kicsik, hogy a színek elmosódnak. Hasonlítsa össze a Broad GDAC rektális adenokarcinómára vonatkozó adatait (READ, N=121) a tüdő adenokarcinómára vonatkozó AACR Genie adataival (LUAD, N=7429).
    • A betegek daganatmintáinak számának növekedésével csökken a szignifikanciaszűrőnket átmenő gének száma. Például a Broad GDAC adatok a hasnyálmirigy-adenokarcinómára (PAAD, N=184) 14 olyan gént eredményez, amelyek nagyobb valószínűséggel mutálódnak, ha a KRAS mutálódik, 24 olyan gént, amelyek nagyobb valószínűséggel mutálódnak, ha a KRAS vad típusú, és 40 olyan gént, amelyek erősen mutánsok, függetlenül attól, hogy a KRAS mutáns vagy vad típusú. Ezzel szemben az MSK cBioPortal és az AACR Genie PAAD adatai ezen alapulnak 766 és 1973 Az adatok szűrése után nem volt komutáció, és csak egy kontramutált gén maradt.
    • A kényelem kedvéért a Spreadsheet „KRAS mutánsok” oldalain felsoroljuk az összes különböző KRAS-mutánst, valamint számukat és százalékos hozzájárulásukat az egyes rákbetegségekhez.

    Hasnyálmirigy adenokarcinómák

    • A mutáns KRAS továbbra is a domináns meghajtó a PAAD-ban (1. táblázat, fent).
    • Ahogy az elemzett minták száma nőtt (184 -> 766 -> 1983), drámaian csökkent azoknak a géneknek a száma, amelyek átmentek a teszteken (78 -> 3 -> 2). Lásd a Táblázat „adatok” oldalait.
    • A TP53 a KRAS-mutáns PAAD daganatok 60-70%-ában mutálódik, és ennek a gyakoriságnak körülbelül a fele, ha a KRAS vad típusú.
    • A három PDAC-adatkészletben a leggyakoribb KRAS-mutánsok ugyanazok, G12D > G12V > G12R >Q61H. Lásd a PAAD KRAS mutánsok oldalát a Táblázatban.
    • Lásd az 1A-1C ábrákat az ábrákon.

    Tüdő adenokarcinómák

    • Mivel a betegminták száma drámaian megnőtt (523 -> 890 -> 7429), a mutáns KRAS-t tartalmazó minták aránya körülbelül egyharmadán maradt (1. táblázat).
    • A G12C mutációk a LUAD-ban talált KRAS-mutánsok körülbelül 40%-át, így az összes LUAD-daganat körülbelül 12%-át teszik ki.
    • Az EGFR mutációk sokkal gyakoribbak a tüdőmintákban, de nem más szövetekben, amikor a KRAS vad típusú (lásd Varmus et al., 2018).
    • A hasnyálmirigy daganatokkal ellentétben a tüdődaganatok nagyobb valószínűséggel tartalmaznak mutáns TP53 géneket, ha a KRAS nem mutált.
    • Teszteink szerint mind a Broad GDAC, mind az MSK cBioPortal adatai nagyon hasonló génkészleteket adnak, amelyek a LUAD-ban erősen mutáltak, függetlenül a KRAS státusztól: mind a 8 erősen mutált gén a cBioPortal adataiban (CSMD3, LRP1B, MUC16, RYR2, TP53) , TTN, USH2A, ZFHX4) szintén megtalálhatók az általános adatok 11 találatában. A sokkal nagyobb AACR Genie adatkészletben azonban csak a TP53 haladja meg a szűrőinket.
    • Lásd a 2A-2C ábrákat az ábrákon.

    Kettőspont (COAD), rektális (Olvas és kolorektális (COADREAD) andenokarcinómák

    • Az MSK cBioPortal és AACR Genie adatkészletekben található COADREAD tumoradatok különálló és különálló daganatokat képviselnek, nem pedig a COAD és a READ összegét.
    • A KRAS gének mutánsok

    Vita

    A missense mutációkat vizsgáló betegminták száma 28-szorosára nőtt a TCGA adatok 2015-ös elemzése óta. A mutáns KRAS génekkel komutált vagy kontramutált gének kimutatására szolgáló szűrőink 2015-ben sok olyan találatot találtak, nem replikálódtak a minták számának növekedésével, és hiányoztak más gének is, amelyek jelentőségét ma már nehéz figyelmen kívül hagyni (pl. EGFR mutánsok tüdőrákban).

    A hasnyálmirigy-adenokarcinómák esetében a mutáns KRAS előfordulási gyakorisága körülbelül 90%, ami azt jelenti, hogy a szignifikánsan mutált gének kiszűrése a sokkal kisebb számú mintából, amelyben a KRAS vad típusú, nehéz. Például még tízszer több mintával (AACR Genie adatok) is nehéz felmérni a mutáns BRAF jelentőségét: 28 esetben, amikor a KRAS vad típusú volt (N=193), 9 esetben, amikor a KRAS mutáns (N=1780) . A TP53-ban a missense mutációk gyakoriak a hasnyálmirigy- (és a tüdő- és vastagbélrákban), függetlenül attól, hogy a KRAS mutáns vagy vad típusú.

    Az EGFR mutációjának jele csak akkor, ha a KRAS vad típusú, nagyon erős mindhárom adatbázisban. Most, hogy a KRAS G12C gátlók a 3. fázisú klinikai vizsgálatokban vannak, évente több tízezer G12C- vagy EGFR-mutációban szenvedő beteg (a 7429 AACR Genie LUAD minta 14%-a és 27%-a) részesül majd előnyben.

    Nem vagyunk patológusok, és szívesen vennénk a COADREAD daganatok kategóriájának meghatározásával kapcsolatos megjegyzéseket. A G13D mutánsok viszonylag gyakoriak ebben a csoportban, amelyek a következőket tartalmazzák

    Az összes KRAS-mutáció 15%-a (szemben a LUAD-ban 3%-kal és a PAAD-ban 1%-kal), csakúgy, mint az A146T-k (

    6% a colorectalis csoportban, de <1% a PAAD-ban és a LUAD-ban). A KRAS G13D és A146T formái a GEF-ek (guanin nukleotidcsere faktorok) hiányában sokkal szélesebb körben cserélik ki a GDP-t GTP-re, mint más mutánsok, de nem világos, hogy ez miért lehet jobban szelektív a vastag- és végbélszövetben.

    Mód

    Az adatokat minden webhelyről letöltötték és formázták, hogy a Sequence Query Language (SQL) segítségével elemezhetők legyenek. Írtunk egy R szkriptet, amely a következőket teszi:

    1. teszt: Egyes minták nagyszámú (ezer) mutált gént tartalmaznak. Úgy érveltünk, hogy az ilyen mintákban a legtöbb mutáció valószínűleg utas, nem pedig rákfenotípusok okozója. Ezért az egyes daganattípusokból származó mintákban meghatároztuk a mutáns gének átlagos számát, és azokat a mintákat, amelyekben a mutáns gének száma meghaladja az átlagot két szórással, kizártuk a további vizsgálatokból.

    2. teszt: A KRAS-t választottuk indexgénként a komutációs elemzéshez. A szkript csak az exonok missense mutációit választotta ki.

    3. teszt: Komutált vagy kontramutált géneket találtunk úgy, hogy a jelölt géneknek két teszten kellett megfelelniük. 3a. teszt: A géneknek mutánsnak kell lenniük azon minták legalább 10%-ában, ahol vagy a KRAS mutáns, vagy ahol a KRAS vad típusú. 3b teszt: A KRAS-szal együtt mutáns gének hívását, ha több mint 4-szer olyan gyakran mutánsak (gyakoriság alapján), amikor a KRAS mutáns. A KRAS-szal kontramutált géneket négyszer gyakrabban hívja meg, ha mutáns, amikor a KRAS vad típusú.

    4. teszt: A KRAS-státusztól függetlenül erősen mutált (>gt20%) géneket is bevontunk.

    5. teszt: A 3. vagy 4. tesztet kielégítő egyetlen missense mutációk külön sorokban jelennek meg.

    A fenti tesztek eredményeit téglalapokból álló rácsként ábrázoltuk, amelyben minden téglalap egy gént reprezentál egy beteg tumormintában. Ha egy gén egy adott mintában mutációt szenved, akkor ez a téglalap az adott missense mutációhoz színeződik. A diagramokon látható fehér téglalapok azt mutatják, hogy az adott tumormintában vad típusú gén volt. A fekete téglalapok csak azokban a sorokban jelennek meg, amelyekben egy adott aminosav változás megfelelt a fenti teszteken, és az adott génben a meghatározott mutációtól eltérő mutációkat jelentenek. Például tüdő adenocarcinomákban a KRAS G12C mutációja megfelelt a fenti teszteken, és az ilyen minták zöld téglalapként jelennek meg a KRASG12C sorban. Az egyéb KRAS-mutációkkal, például G12V-vel, G13D-vel stb. rendelkező páciensminták fekete téglalapként jelennek meg ebben a sorban.

    További információért forduljon Dr. Ming Yi-hez a [email protected] címen.

    Új egyértelműség a Warburg-effektusról

    RAS-kötő vegyületek: más szemszögből közelítjük meg a gyógyszerezhetetlent

    Ha szeretné reprodukálni a tartalom egy részét vagy egészét, tekintse meg az NCI-információk újrafelhasználása című részt a szerzői jogokkal és az engedélyekkel kapcsolatos útmutatásért. Engedélyezett digitális sokszorosítás esetén kérjük, adja meg forrásként a National Cancer Institute-t, és adja meg az eredeti NCI-termékre mutató hivatkozást az eredeti termék címével, pl. „Frissítés: Mutációk humán rákban a KRAS lencséjén keresztül eredetileg a National Cancer tette közzé. Intézet."

    Szívesen vesszük észrevételeiket ehhez a bejegyzéshez. Minden megjegyzésnek meg kell felelnie a megjegyzésekre vonatkozó szabályzatunknak.


    A legtöbb hőmérséklet-érzékeny mutáció hatással van a fehérjékre, és a fehérjefunkció elvesztését okozza a nem megengedő hőmérsékleten. A megengedő hőmérséklet az, amelyen a fehérje általában megfelelően tud hajtogatni, vagy megfelelően hajtogatva marad. Magasabb hőmérsékleten a fehérje instabil, és nem működik megfelelően. Ezek a mutációk általában recesszívek a diploid szervezetekben. A hőmérsékletérzékeny mutánsok reverzibilis mechanizmust szerveznek [1], és képesek bizonyos géntermékeket redukálni a növekedés különböző szakaszaiban, és könnyen elvégezhetők a növekedési hőmérséklet megváltoztatásával.

    A permisszív hőmérséklet az a hőmérséklet, amelyen a hőmérséklet-érzékeny mutáns géntermék normális, funkcionális fenotípust vesz fel. [2] Ha egy hőmérséklet-érzékeny mutánst megengedő körülmények között nevelnek, a mutáns géntermék normálisan viselkedik (ami azt jelenti, hogy a fenotípus nem figyelhető meg), még akkor is, ha mutáns allél van jelen. Ez a sejt vagy szervezet túlélését eredményezi, mintha egy vad típusú törzs lenne. Ezzel szemben a nem megengedő hőmérséklet vagy restrikciós hőmérséklet az a hőmérséklet, amelyen a mutáns fenotípus megfigyelhető.

    A hőmérsékletérzékeny mutációk általában misszensz mutációk, amelyek ezután egy meghatározott szükséges gén funkcióját hordozzák a standard, megengedő, alacsony hőmérsékleten. Alternatív megoldásként hiányzik a funkciója meglehetősen magas, nem megengedő hőmérsékleten, és hipomorf (a génfunkció részleges elvesztése) és közepes, félig megengedő hőmérsékletet mutat. [3]

    A hőmérséklet-érzékeny mutánsok hasznosak a biológiai kutatásokban. Lehetővé teszik a sejt vagy szervezet túléléséhez szükséges alapvető folyamatok tanulmányozását. Az esszenciális gének mutációi általában halálosak, ezért a hőmérséklet-érzékeny mutánsok lehetővé teszik a kutatók számára, hogy korlátozó hőmérsékleten indukálják a fenotípust, és tanulmányozzák a hatásokat. A hőmérséklet-érzékeny fenotípus kifejezhető egy adott fejlődési szakaszban a hatások tanulmányozására.

    Példák Szerkesztés

    Az 1970-es évek végén a sejt életképességéhez és az új rügyek növekedéséhez nélkülözhetetlen bimbózó élesztő szekréciós útvonalat hőmérséklet-érzékeny mutánsok segítségével feldarabolták, így huszonhárom alapvető gént azonosítottak. [4]

    Az 1970-es években a gyümölcslégyben több hőmérséklet-érzékeny mutáns gént azonosítottak, mint pl. shibire ts , amely a szinaptikus funkció első genetikai disszekciójához vezetett. [5] Az 1990-es években a hsp70 hősokk-promotert használták a gyümölcslégy hőmérséklet-modulált génexpressziójában. [6]

    Bakteriofág Szerk

    Egy fertőzés egy E. coli A gazdasejt egy bakteriofág (fág) T4 hőmérsékletre érzékeny (ts) által feltételesen letális mutáns által magas restrikciós hőmérsékleten általában nem vezet fágnövekedéshez. Azonban egy társfertőzés korlátozó körülmények között kettővel ts A különböző génekben hibás mutánsok általában erőteljes növekedéshez vezetnek az intergénikus komplementáció miatt. A felfedezés ts a T4 fág mutánsai, és az ilyen mutánsok komplementációs tesztekben való alkalmazása hozzájárult számos gén azonosításához ebben a szervezetben. [7] Mivel egy gén által meghatározott polipeptid több kópiája gyakran multimereket képez, kevert fertőzések két különböző ts Az ugyanazon génben hibás mutánsok gyakran kevert multimerekhez és a funkció részleges helyreállításához vezetnek, ezt a jelenséget intragenikus komplementációnak nevezik. Intragén kiegészítése ts az ugyanabban a génben hibás mutánsok információt szolgáltathatnak a multimer szerkezeti felépítéséről. [8]

    A fág növekedése ts mutánsokat részben korlátozó körülmények között használták a gének funkcióinak azonosítására. Így azonosították a DNS-károsodások helyreállításában használt géneket [9] [10], valamint a genetikai rekombinációt befolyásoló géneket. [11] [12] Például a termesztés a ts A DNS-javító mutáns közepes hőmérsékleten lehetővé teszi néhány utódfág előállítását. Ha azonban az ts mutáns UV fénnyel besugárzott, túlélése erősebben csökken, mint a besugárzott vad típusú T4 fág túlélése.

    A T4 fágban olyan feltételes letális mutánsokat is izoláltak, amelyek képesek voltak növekedni magas hőmérsékleten, de nem képesek alacsony hőmérsékleten növekedni. [13] Ezek a hidegérzékeny mutánsok egy különálló génkészletet határoztak meg, amelyek közül néhányat korábban más típusú feltételes letális mutánsok azonosítottak.


    UNIVERSITY PARK, Pa. – A CRISPR/Cas9 rendszert használó génszerkesztés új megközelítése megkerüli a betegséget okozó mutációkat egy génben, lehetővé téve az egyetlen génhez kapcsolódó genetikai betegségek kezelését, mint például a cisztás fibrózis, a sarlósejtes vérszegénység bizonyos típusai, és más ritka betegségek. A Penn State kutatói által kifejlesztett és egereken és emberi szövettenyészetekben tesztelt módszer a gén új, teljesen működőképes másolatának behelyezését jelenti, amely kiszorítja a mutált gént.

    Ennek a megközelítésnek a bizonyítékát a Penn State kutatói fejlesztették ki a Molecular Therapy folyóiratban április 20-án megjelenő cikkben.

    A CRISPR/Cas9 rendszer ígéretes új génterápiákat tett lehetővé, amelyek képesek megcélozni és kijavítani a gén betegséget okozó mutációit. Ebben a folyamatban a Cas9 – egy bakteriális fehérje – elvágja a DNS-t egy meghatározott helyen, ahol a genetikai szekvencia szerkeszthető, levágható vagy új szekvencia beilleszthető a DNS javítása előtt. A jelenlegi javítási stratégiáknak azonban két fő korlátja van. Először is, a közös javítási stratégia, az úgynevezett „homológia-irányított javítás”, specifikus fehérjék használatát követeli meg a sejten belül, amelyek csak a sejtosztódás során vannak jelen, ami azt jelenti, hogy a génjavító folyamat nem használható a legtöbb felnőtt szövetben, ahol a sejtosztódás ritkán fordul elő.

    "A második kihívás abból a tényből fakad, hogy még akkor is, ha egy betegséget egyetlen gén okoz, az adott génen belül számos különböző mutáció eredménye lehet" - mondta Douglas Cavener, a Penn State biológiaprofesszora és a tanulmány vezető szerzője. . „A homológia-irányított javítással minden egyes mutációra meg kell terveznünk és tesztelnünk kell a stratégiát, ami költséges és időigényes lehet. Ebben a tanulmányban megterveztük a Co-opting Regulation Bypass Repair (CRBR) elnevezésű megközelítést, amely osztódó és nem osztódó sejtekben/szövetekben, valamint egy génen belüli mutációk spektrumában egyaránt használható. Ez a megközelítés különösen ígéretes az egyetlen gén által okozott ritka genetikai betegségek esetében, ahol a korlátozott idő és erőforrás jellemzően kizárja a sok lehetséges betegséget okozó mutáció tervezését és tesztelését.

    A CRBR kihasználja a CRISPR/Cas9 rendszert és a „nem homológ végcsatlakozásnak” nevezett sejtjavító útvonalat, hogy genetikai szekvenciát illesszen be a mutált gén promoterrégiója – a genetikai szekvencia, amely szabályozza, hogy a gén mikor és hol működik – és a mutált gén közé. a gén egy része. Az újonnan beillesztett szekvencia a normál gén kondenzált változatát tartalmazza, amelyet a mutált változat helyett használnak. A beillesztett szekvencia végén található terminátorszekvencia megakadályozza, hogy a fennmaradó downstream mutált gént felhasználják. Mivel a CRBR nem támaszkodik a homológia-irányított javításhoz szükséges fehérjékre, minden típusú felnőtt szövetben használható.

    „Megközelítésünk a natív promótert választja egy génhez” – mondta Jingjie Hu, a Penn State végzős hallgatója és a tanulmány első szerzője. „Ez azt jelenti, hogy az újonnan beillesztett gén ugyanabban az időben és megfelelő szinten expresszálódik a sejten belül, mint az általa helyettesített gén. Ez előnyt jelent más típusú génterápiákhoz képest, amelyek külső promóterre támaszkodnak a gén magas szintű expressziójának előmozdítása érdekében, ami negatív hatásokhoz vezethet, ha túl sok termelődik, vagy ha bizonyos fiziológiai körülmények között hiányzik az alapvető szabályozási válasz.”

    A kutatócsoport egy sor elméleti bizonyítási kísérletet végzett, hogy bemutassa ennek a módszernek a hasznosságát. Először a PERK génre összpontosítottak, amelynek mutációi a Wolcott-Rallison-szindrómának nevezett ritka betegséghez vezethetnek. A szindróma akkor alakul ki, ha a gén mindkét szülőtől örökölt másolatai mutációkat mutatnak – ez egy „recesszív” betegség –, és újszülöttkori cukorbetegséget, csontrendszeri problémákat, növekedési késleltetést és egyéb tüneteket okozhat.

    A kutatók CRBR segítségével egészséges egerekbe helyezték be a PERK gént, és olyan egerekkel tenyésztették őket, amelyeknek mutációja volt a génben. Az eredményül kapott egerek, amelyek egy CRBR által szerkesztett PERK gént és egy mutált PERK gént tartalmaztak, nem mutatták a szindrómához kapcsolódó tipikus rendellenességeket, ami azt jelzi, hogy a CRBR által szerkesztett gén képes megmenteni a PERK gén funkcióját a Wolcott-Rallison egérmodellben. szindróma.

    Ezt követően a kutatók emberi szövetekben tesztelték a CRBR módszert, ebben az esetben az inzulingénre összpontosítva. Zöld fluoreszcens fehérje marker génszekvenciát illesztettek be az inzulin gén promoter és az inzulint kódoló szekvencia közé humán holttestsejtekben. Ez a kísérlet a fluoreszcens fehérje expresszióját eredményezte az inzulint szekretáló sejtekben, de más sejttípusokban nem, ami arra utal, hogy az új szekvencia szigorúan szabályozott inzulin promoter szabályozása alatt.

    "Eredményeink azt mutatták, hogy a CRBR génjavítás képes helyreállítani a PERK génműködést egerekben, és feltárták a CRBR potenciális hasznosságát az emberi szövetek génjavításában" - mondta Hu.

    A kutatók megjegyzik, hogy a CRISPR/Cas9 segítségével végzett génszerkesztés hibás lehet. Például a homológiára irányított javításon alapuló stratégiák potenciálisan káros mutációkat okozhatnak a kódoló szekvenciában, ha a javítás nem történik meg megfelelően. A CRBR segítségével a kutatók a gén olyan régiójába való beépülést célozzák meg, amely nem kódol fehérjét, aminek jobban toleránsnak kell lennie ezekkel a hibákkal szemben.

    „A CRISPR/Cas9-et használó génterápiák, mint például a CRBR továbbra is szembesülnek azzal a kihívással, hogy javítógépeket juttatjanak be a kívánt sejtekbe” – mondta Cavener. „Az egyik ígéretes fejlemény az, hogy sejteket vagy szöveteket izolálnak az érintett betegből, laboratóriumban kijavítanak egy mutáns gént, majd a helyreállított sejteket vagy szöveteket visszaültetik a betegbe. Reméljük, hogy miközben a kutatók tovább fejlesztik a bejuttatási módszereket, a CRBR felhasználható a Wolcott-Rallison-szindróma és más emberi genetikai betegségek kezelésére is.

    Cavener és Hu mellett a Penn State kutatócsoportjába tartozik Rebecca Bourne kutatási asszisztens, Barbara McGrath biológiakutató egyetemi hallgató, Alice Lin és Zifei Pei biológiakutató adjunktus. Ezt a munkát a National Institutes of Health és a Penn State Eberly College of Science támogatta.


    A laboratóriumi egér a legszélesebb körben használt állatmodell az emlősök fejlődésének és szaporodásának genetikájának és biológiájának tanulmányozására. Az embrionális őssejtek (ESC) géncélzási technológiája és az általa lehetővé tett kifinomult genomiális manipulációk hosszú ideig csak erre a szervezetre jellemzőek, ez volt a fő tényező abban, hogy az egér modellrendszerként az elmúlt három során előkelő helyre került. évtizedekig. A CRISPR/Cas9 technológia közelmúltbeli megjelenése demokratizálja a genomszerkesztés alkalmazását lényegében minden szervezetre. Mindazonáltal az egér mögött álló tudományos infrastruktúra továbbra is a választott szervezetté teszi az emlősök fejlődésének molekuláris mechanizmusainak tanulmányozására, valamint az emberi fejlődés és betegségek modellezésére.

    A nemzetközi közösség jó úton halad afelé, hogy minden egérgén esetében kiütéseket generáljon, és meghatározza a fenotípusos következményeket. Az összes gén több mint fele egérben mutálódott, és több százról azt találták, hogy megzavarja a termékenységet vagy a gametogenezist [1]. Azonban a reproduktív genetika – és a felnőttek élettani kutatásának más területei – egyik fő akadálya az, hogy

    Az összes egérgén 1/4-ére van szükség az életképességhez [2]. Így a teljes állati kiütések nem használhatók e génekkel szembeni követelmények tanulmányozására bizonyos szövetekben, például a reproduktív rendszerben.Ez a régóta fennálló probléma vezérelte a feltételes mutagenezis technológiák kifejlesztését, főként az egereknél általánosan használt Cre/loxP helyspecifikus rekombináz rendszert [3]. Ez a technológia elvileg sok problémát megold az embrionális letális gének szövetspecifikus funkcióinak vizsgálatával. Miért kívánatos tehát egy másik megközelítés, mint amilyet ebben a számban Miura és munkatársai mutattak be [4]?

    Két fontos kérdés korlátozza a standard feltételes mutagenezis hatékonyságát: 1) hatékony és eredményes Cre meghajtók fejlesztése és 2) ennek a stratégiának az egértenyésztés-intenzív vonatkozása. Általában a vizsgáló a korábban jellemzett Cre-vonalaktól függ, és megkapja a releváns vezető egereket (ebben a történetben egy Cre-t, amely a gametogenezis egy meghatározott szakaszában működik, mint például a Vasa-Cre), amelyek kereszteződnek egy floxált alléllal. Az embrionális letális érdeklődésre számot tartó génből (GOI), majd a floxed allélra heterozigóta testvérpárt (amelyek közül legalább az egyik Cre transzgént tartalmaz) keresztezik, hogy a floxed allélra homozigóta Cre transzgént tartalmazó utódokat kapjanak. Ezekben az egerekben a csíravonal ezután megvizsgálható. Amint az 1. ábrán látható, legalább három generációra van szükség a kísérleti állatok megszerzéséhez. Ezért ez nem csak időigényes, hanem drága is, és jelentős számú állatot igényel.

    A hagyományos feltételes mutagenezis összehasonlítása a Miura embriókomplementációs módszerével et al. GOI, érdeklődésre számot tartó gén Flox, a kritikus régiót szegélyező loxP helyeket tartalmazó gén.

    A hagyományos feltételes mutagenezis összehasonlítása a Miura embriókomplementációs módszerével et al. GOI, érdeklődésre számot tartó gén Flox, a kritikus régiót szegélyező loxP helyeket tartalmazó gén.

    Miura és munkatársai bemutatták egy alternatív, egygenerációs megközelítés megvalósíthatóságát a fent említett problémák enyhítésére. Az alapkoncepció az embriókomplementáció alkalmazása, melynek során kiméra egereket hoznak létre, amelyek két különböző genomból származó sejteket tartalmaznak, amelyek különböző mutációkat hordoznak. Ezeket az egereket olyan ESC-k bejuttatásával állítják elő, amelyek hiányosak egy GOI számára (ebben az esetben Dnmt3b) gazda blasztocisztákba, amelyekből hiányzik a Nanos3 gén, amely a csírasejtek fejlődéséhez szükséges. Nanos3- a hiányos egerek eltüntették az ősi csírasejt-készletet, így sterilek. Hiány a Dnmt3b embrióhalált okoz

    ¾ a terhesség alatt. Így a kiméra egerek csak akkor lehetnek életképesek, ha a kulcsfontosságú sejtvonalak a gazdaembriókból származnak, és csak akkor lehetnek termékenyek, ha az ESC-k kolonizálják a csíravonalat és Dnmt3b nem nélkülözhetetlen a termékenységhez. A szerzők pontosan ezt találták.

    Bár az ezen egerek előállításához használt általános technológiák rutinszerűek, a módszer két nem triviális lépést igényel. Az egyik a csírasejt-hiányos (Nanos3 −/− ) embrió-recipiensek. Ezt úgy érték el de novo CRISPR/Cas9 mutagenezis megtermékenyített peték mikroinjekciójával Cas9 mRNS-sel és 3 rendkívül hatékony sgRNS-sel Nanos3. Következő in vitro tenyészetet a blasztociszta stádiumig, az embriókat ezután mikroinjektálják Dnmt3b −/− ESC-k. Ebben a cikkben az ESC-k már elérhetőek voltak egy adattárból, de ellenkező esetben homozigóta mutáns ESC-vonalat kell származtatni. Ezt általában hagyományos géncélzással ESC-kben, az ESC-k CRISPR-mutagenezisével, vagy heterozigóta állatok keresztezésével termelt blasztocisztákból származó új ESC-vonal származtatásával hajtják végre.

    Ennek a megközelítésnek az az igazi ereje, hogy az alapító állatok közvetlenül értékelhetők. Feltéve, hogy jó minőségű, a kérdéses mutációt tartalmazó ESC-ket használunk, akkor az egyetlen módja annak, hogy az ESC-kből származó utódok keletkezzenek (a gazdaembrió és az ESC-k közötti szőrszíngenetika megfelelő különbségei használhatók), ha a GOI NEM szükséges a termékenységhez. A termékeny kimérák származtatásának elmulasztása azt jelzi, hogy a GOI valóban szükséges a termékenységhez. A kifejlett kimérákat ezután fenotípusos elemzésnek vethetjük alá. Ha fennáll annak a gyanúja, hogy a mutáció a csírasejtfejlődés korai szakaszában hat (például ha a felnőtteknél nincs csírasejt), akkor a kiméra embriókat a megfelelő időpontokban meg lehet vizsgálni.

    Csak néhány hátránya van a megközelítésnek. Az egyik a homozigóta mutáns ESC-k követelménye. Amint fentebb említettük, van néhány módszer ezek származtatására, de van egy kis rejtély: az ESC-vonal minőségének meghatározásának arany standardja az, hogy képes „csíravonalat hozni”, vagyis megtartja a potenciált hozzájárul a felnőtt egér összes szövetéhez, beleértve a csírasejteket is. Ha azonban az indiai kormány szükséges az embrionális életképességhez, egy ilyen vonalat nem lehet előzetesen tesztelni. Ezért ajánlatos több sort beszerezni. Valójában a „megmentett” kimérák előállításának hatékonysága alacsony volt a Miurában et al. papír, valószínűleg az alacsony minőségű ESC-k eredménye. Ezen túlmenően, ha a gametogenezist az ivarmeghatározási szakaszon túl is meg akarjuk vizsgálni, akkor mind a férfi, mind a női mutáns ESC-re lenne szükség. A második hátrány azzal kapcsolatos, hogy mikor van először szükség a halálos génre a csíravonalban, és ez hogyan kapcsolódik a vizsgáló érdeklődési stádiumához. Például, ha valakit érdekelne egy gén szerepe a meiózisban, de a génre szükség van a PGC túléléséhez, akkor elakadna.

    A technikai problémák ellenére az embriókomplementációs módszer nagyon okos, és első vonalbeli megközelítésnek kell tekinteni egy egyébként halálos gén csíravonalban betöltött szerepének kezelésére. Vannak technikai lehetőségek a folyamat egyszerűsítésére, például elektroporáció alkalmazása mikroinjekció helyett CRISPR-mutáció esetén Nanos3 zigótákban [5], és hasonlóan az ESC-k CRISPR/Cas9/sgRNS vektorral történő transzfektálásához. Végezetül, mint aki egekig magas havi számlát fizet az egér napidíjaiért, és ezért retteg egy feltételes mutagenezis projekt mellett, amelyre több hónapig tartó válaszra van szükség, az alapító állatok használatának ez a lehetősége nagyon vonzó.


    Ritka Betegségek Adatbázis

    A NORD hálás köszönetét fejezi ki David Brouchnak, a Notre Dame Egyetem NORD gyakornokának, Jakub Tolarnak, MD, PhD, ügyvezető dékánhelyettesnek, az Orvostudományi Kar kiváló McKnight Egyetemi professzorának, Gyermekgyógyászati ​​Tanszék, Vér- és Velőtranszplantációs Osztály, igazgató, Őssejt Intézet , Edmund Wallace Tulloch és Anna Marie Tulloch őssejtbiológia, genetika és genomika tanszék, valamint Blanche P Alter, MD, MPH, FAAP, Clinical Genetics Branch, Division of Cancer Epidemiology and Genetics, National Cancer Institute, segítségért ez a jelentés.

    A Fanconi vérszegénység szinonimája

    Általános megbeszélés

    A Fanconi-anaemia (FA) egy ritka genetikai rendellenesség, az öröklött csontvelő-elégtelenség szindrómák kategóriájába tartozik. A betegek felét 10 éves koruk előtt diagnosztizálják, míg körülbelül 10%-ukat felnőttként. A korai diagnózis megkönnyíti az olyan születési rendellenességekben szenvedő betegeket, mint kis méret, kóros hüvelykujj és/vagy sugárcsont, bőrpigmentáció, kis fej, kis szem, rendellenes veseszerkezet, valamint szív- és csontrendszeri rendellenességek. A rendellenesség gyakran a csontvelőben a vérsejtek, vörösvérsejtek, fehérvérsejtek és vérlemezkék termelésének progresszív hiányával jár. Az érintett egyéneknél nagyobb a kockázata a csontvelőben lévő vérképző sejtek rákos megbetegedésének, az úgynevezett akut mieloid leukémiának (AML), vagy a fej, a nyak, a bőr, a gyomor-bélrendszer vagy a nemi szervek daganatainak kialakulásának. Az FA egyformán fordul elő férfiakban és nőkben, és minden etnikai csoportban megtalálható. Általában autoszomális recesszív genetikai rendellenességként öröklődik, de X-hez kötött öröklődésről is beszámoltak.

    Bevezetés

    Az FA-nak számos altípusa létezik, amelyek legalább 18 különböző gén mindegyikében két génmutáció öröklődéséből származnak. A legtöbb altípus közös tünetekkel és leletekkel rendelkezik. A Fanconi-vérszegénység nem azonos a Fanconi-szindrómával, amely egy ritka veseműködési rendellenesség.

    Jelek és tünetek

    Az FA tünetei személyenként változnak. Az azonosított tünetek közé tartozik a különféle fizikai rendellenességek, a csontvelő-elégtelenség és a rosszindulatú daganatok fokozott kockázata. A fizikai rendellenességek általában kora gyermekkorban mutatkoznak meg, de ritka esetekben felnőttkorban diagnosztizálják. A vértermelési problémák gyakran 6-8 éves kor között alakulnak ki. A csontvelő-elégtelenség végül az érintett egyének többségénél jelentkezik, bár a progresszió és a megjelenés kora változó. A felnőttkort megélő betegeknél valószínűleg sokkal korábban alakul ki fej-nyaki, nőgyógyászati ​​és/vagy gyomor-bélrendszeri daganat, mint az általános populációban, függetlenül attól, hogy volt-e korábban vérproblémáik, vagy sem.

    Fizikai rendellenességek
    Az FA-ban érintett egyének legalább 60%-a legalább egy fizikai rendellenességgel születik. Ez magában foglalhatja a következők bármelyikét:

    -alacsony termetű
    - hüvelykujj és kar anomáliái: extra vagy rosszul formázott vagy hiányzó hüvelykujj és ujj, vagy nem teljesen fejlett vagy hiányzó sugár (az alkar egyik csontja)
    - a csípő, a gerinc vagy a bordák csontrendszeri anomáliái
    - vese szerkezeti problémák
    - bőrpigmentáció (ún. café au lait foltok)
    -kis fej
    - Kicsi, keresztben lévő vagy egymástól távol elhelyezkedő szemek
    -alacsony születési súly
    - emésztőrendszeri nehézségek
    - kis ivarszervek férfiaknál
    - a szívkamráit elválasztó szövetek defektusai

    A vérszegénységben szenvedők fáradtságot, fokozott alvásigényt, gyengeséget, szédülést, szédülést, ingerlékenységet, fejfájást, sápadt bőrszínt, légzési nehézségeket és szívtüneteket tapasztalhatnak.

    Minimális sérülést és spontán vérzést okozhat a nyálkahártya, különösen az íny és az orr.

    Csontvelő-elégtelenség
    A csontvelő a test hosszú csontjainak közepén található szivacsos anyag. A csontvelő speciális sejteket (hematopoietikus őssejteket) termel, amelyek növekednek, és végül vörösvérsejtekké (eritrociták), fehérvérsejtekké (leukociták) és vérlemezkékké fejlődnek. A sejtek felszabadulnak a véráramba, hogy az egész szervezetben bejárják meghatározott funkcióikat. A vörösvérsejtek oxigént szállítanak a szervezetbe, a fehérvérsejtek segítenek a fertőzések leküzdésében, a vérlemezkék pedig lehetővé teszik a szervezet számára, hogy vérrögöket képezzenek a vérzés megállítása érdekében.

    A progresszív csontvelő-elégtelenség jellemzően 10 éves korban jelentkezik, és általában alacsony vérlemezkeszinttel vagy alacsony fehérvérsejtszámmal jár. 40-50 éves korban a csontvelő-elégtelenség, mint első súlyos esemény becsült előfordulása több mint 50%.

    Az érintett egyéneknél a csontvelő összes sejteleme – a vörös- és fehérvérsejtek, valamint a vérlemezkék – alacsony szintje fejlődik ki, ami a következőkhöz vezethet:
    - a keringő vörösvértestek alacsony szintje – vérszegénység
    - alacsony fehérvérsejtszám - leukopenia
    - a neutrofilek (a fehérvérsejtek egy fajtája) alacsony szintje - neutropenia
    - alacsony vérlemezkeszám - thrombocytopenia

    A rosszindulatú daganatok fokozott kockázata
    Az FA-ban szenvedő egyéneknél nagyobb a kockázata a rák bizonyos formáinak, köztük az akut mieloid leukémiának és a specifikus szolid daganatoknak, mint az általános populációnak. Az érintett egyéneknél rendkívül nagy a kockázata a fej és a nyak régióját, a gyomor-bélrendszert, a nyelőcsövet vagy a nőgyógyászati ​​régiókat érintő rák kialakulásának. Ezek többsége a rák egy specifikus formája, amelyet laphámsejtes karcinómának neveznek. A csontvelő-elégtelenséget férfihormonokkal (ún. „androgénekkel”) kezelt FA betegeknél fokozott a májdaganatok kockázata.

    A rákkal összefüggő esetek körülbelül 30 százalékában a rosszindulatú daganat kialakulása megelőzi az FA diagnózisát.

    Okoz

    Az FA-ban szenvedő egyedek sejtjeiben lévő kromoszómák nem képesek kijavítani a dezoxiribonukleinsav (DNS) károsodását, így könnyen törnek és átrendeződnek (kromoszóma-instabilitás). A DNS a genetikai kód hordozója, és a DNS károsodása mindennapos jelenség. A legtöbb emberben a DNS károsodása helyreáll. Azonban az FA-ban szenvedő egyéneknél gyakrabban fordulnak elő törések és átrendeződések, és testük lassú vagy nem képes helyreállítani a sérülést.

    Legalább 18 gén mutációja okozhat FA-t. Az e gének által kódolt fehérjék egy közös, FA-útvonalon működnek együtt, amely DNS-károsodás esetén lép működésbe. Az FA-útvonal bizonyos fehérjéket küld a sérült területre, így a DNS helyreállítható, és a DNS tovább másolható (replikálható). Nyolc fehérje alkot egy FA magkomplexként ismert komplexet, amely két gént aktivál fehérjék előállítására, az úgynevezett FANCD2-t és FANCI-t. E két fehérje aktiválása a DNS-javító fehérjéket a DNS-károsodás területére juttatja.

    Az FA esetek 80-90 százaléka a három gén egyikének mutációinak tulajdonítható. FANCA, FANCC, és FANCG. Ezek a gének utasításokat adnak az FA magkomplex komponenseinek előállításához. Az FA magkomplexhez kapcsolódó számos gén bármelyikében bekövetkező mutációk a komplex működésképtelenné válását eredményezik, és megzavarják a teljes FA útvonalat. Ennek az útvonalnak a megszakítása DNS-károsodás felhalmozódását eredményezi, amely abnormális sejthalálhoz vagy abnormális sejtnövekedéshez vezethet. A sejtek halála a vérsejtek számának csökkenését és az FA-val kapcsolatos fizikai rendellenességeket eredményezi. A kontrollálatlan sejtnövekedés akut mieloid leukémia vagy más rák kialakulásához vezethet.

    Az FA legtöbb esete autoszomális recesszív módon öröklődik. A recesszív genetikai rendellenességek akkor fordulnak elő, ha az egyén egy abnormális gén két másolatát örökli ugyanarra a tulajdonságra, mindkét szülőtől egyet. Ha egy egyén egy normál gént és egy gént örököl a betegségért, akkor a személy a betegség hordozója lesz, de általában nem mutat tüneteket. A kockázata annak, hogy két hordozó szülő átadja a megváltozott gént, és lesz egy érintett gyermeke, 25% minden terhességnél. Minden terhességnél 50%-os annak a kockázata, hogy a szülőkhöz hasonlóan hordozó gyermek születik. 25% az esélye annak, hogy egy gyermek normális géneket kapjon mindkét szülőjétől. A kockázat ugyanaz a férfiak és a nők esetében.

    Azok a szülők, akik közeli rokonok (rokonok), nagyobb eséllyel hordozzák ugyanazt a kóros gént, mint a nem rokon szülők, ami növeli a recesszív genetikai rendellenességben szenvedő gyermekvállalás kockázatát.

    A következő gének mutációi szintén FA-t okoznak, és autoszomális recesszív módon öröklődnek: BRCA2, BRIP1, FANCB, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCI, ERCC4, FANCL, FANCM, PALB2, RAD51C, SLX4, és UBE2T.

    Az FANCB gén az X kromoszómán található, és az összes FA eset kevesebb mint 1 százalékát okozza. Ez az FA gén X-hez kötött recesszív tulajdonságként öröklődik.

    Az X-kromoszómához kapcsolódó genetikai rendellenességek olyan állapotok, amelyeket az X kromoszómán lévő rendellenes gén okoz, és főként férfiakban nyilvánul meg. Azok a nőstények, akiknek az egyik X-kromoszómájukban megváltozott gén található, a betegség hordozói. A hordozó nőstények általában nem mutatnak tüneteket, mivel a nőstényeknek két X-kromoszómájuk van, és csak az egyik hordozza a megváltozott gént. A hímeknek van egy X-kromoszómája, amelyet az anyjuktól örökölnek, és ha egy férfi olyan X-kromoszómát örököl, amely egy megváltozott gént tartalmaz, akkor kialakul a betegség. Az X-hez kötött rendellenesség női hordozóinak minden terhességnél 25% esélyük van egy olyan hordozó lányra, mint amilyen ők, 25% az esélye annak, hogy nem hordozó lánya, 25% az esélye annak, hogy fia legyen érintett a betegségben, és 25% az esélye, hogy sértetlen fia szülessen. Ha egy X-hez kötött rendellenességben szenvedő hím képes szaporodni, akkor a megváltozott gént minden lányának továbbadja, akik hordozók lesznek. Egy hím nem adhat át X-hez kötött gént fiainak, mert a hímek X kromoszómájuk helyett mindig Y kromoszómájukat adják át hím utódoknak.

    Mutációk a RAD51 gén autoszomális domináns FA-t okoz. Domináns genetikai rendellenességek akkor fordulnak elő, ha egy abnormális gén egyetlen példányára van szükség egy adott betegség kialakulásához. A kóros gén örökölhető bármelyik szülőtől, vagy az érintett egyedben bekövetkező új mutáció (génváltozás) eredménye. Minden terhesség esetén 50% annak a kockázata, hogy az abnormális gént az érintett szülőtől az utódba továbbítják. A kockázat ugyanaz a férfiak és a nők esetében. A mai napig minden érintett személy FA miatt a RAD51 génmutációnak van egy spontán (de novo) genetikai mutációja, amely a petesejtben vagy a hímivarsejtben fordul elő. Ilyen helyzetekben a rendellenesség nem öröklődik a szülőktől.

    Érintett populációk

    A FA előfordulási aránya a becslések szerint körülbelül 1 a 136 000 születésből. Ez az állapot gyakrabban fordul elő askenázi zsidó származású emberek, Spanyolország roma lakossága és fekete dél-afrikaiak körében.

    Kapcsolódó rendellenességek

    A következő rendellenességek tünetei hasonlóak lehetnek az FA tüneteihez. Az összehasonlítások hasznosak lehetnek a differenciáldiagnózishoz.

    Kromoszóma-instabilitási szindrómák: autoszomális recesszív öröklött rendellenességek, amelyek fokozott kromoszómatöréssel és genetikai instabilitással járnak. Ezek a kromoszóma-rendellenességek az átlagosnál nagyobb kockázatot jelentenek bizonyos rákos megbetegedések, különösen a leukémia kialakulásában. A legtöbb érintett egyénben további rendellenességek is jelen vannak. A kromoszómális instabilitási szindrómák közé tartozik a Bloom-szindróma, az ataxia telangiectasia, a Nijmegen-törés szindróma és a xeroderma pigmentosum. (Ha többet szeretne megtudni ezekről a betegségekről, válassza ki az adott rendellenesség nevét keresőkifejezésként a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    Szerzett aplasztikus anémia: ritka rendellenesség, amelyet mély, szinte teljes csontvelő-elégtelenség okoz. A csontvelő a test hosszú csontjainak közepén található szivacsos anyag. A csontvelő speciális sejteket (hematopoietikus őssejteket) termel, amelyek növekednek, és végül vörösvérsejtekké (eritrociták), fehérvérsejtekké (leukociták) és vérlemezkékké fejlődnek. Szerzett aplasztikus anémia esetén a vérképző őssejtek szinte teljes hiánya végül a vörös- és fehérvérsejtek, valamint a vérlemezkék alacsony szintjét eredményezi (pancitopénia). A szerzett aplasztikus vérszegénységhez kapcsolódó specifikus tünetek változhatnak, de közé tartozik a fáradtság, a krónikus fertőzések, a szédülés, a gyengeség, a fejfájás és a túlzott vérzéses epizódok. Bár a szerzett aplasztikus vérszegénység egyes esetei más rendellenességek miatt következnek be, a kutatók most úgy vélik, hogy sok eset a páciens immunrendszerének rendellenességéből adódik, amelyben az immunrendszer tévesen a csontvelőt célozza meg (autoimmunitás). Ez a betegek körülbelül felének immunterápiára adott válaszán alapul, legyen szó ATG-ről, ciklosporinról, nagy dózisú szteroidokról vagy ciklofoszfamidról. (Ha többet szeretne tudni erről a rendellenességről, válassza az „aplasztikus anémia” kifejezést keresési kifejezésként a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    Thrombocytopenia-absent radius (TAR) szindróma: ritka genetikai rendellenesség, amely születéskor nyilvánvaló (veleszületett). A rendellenességre a vérlemezkék alacsony szintje (thrombocytopenia) jellemző, ami potenciálisan súlyos vérzéses epizódokat (vérzést) eredményez elsősorban csecsemőkorban. További jellemző leletek közé tartozik a csont hiánya (aplázia) az alkar hüvelykujj oldalán (radii), és néha alulfejlettség (hipoplázia) vagy a csont hiánya az alkar „rózsaszín” oldalán (ulnae). Egyéb rendellenességek is jelen lehetnek, mint például a szív szerkezeti rendellenességei (veleszületett szívhibák), vese (vese) rendellenességek és/vagy értelmi fogyatékosság, amelyek másodlagosak lehetnek a csecsemőkorban a koponyában fellépő vérzéses epizódok miatt (intrakraniális vérzések). A TAR-szindróma autoszomális recesszív tulajdonságként öröklődik. (Ha további információra van szüksége erről a rendellenességről, válassza a „thrombocytopenia-absent radius” keresési kifejezést a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    Dyskeratosis congenita, más néven Zinsser-Cole-Engman szindróma: ritka genetikai rendellenesség, amelyet a bőr színének sötétedése és/vagy szokatlan hiánya (hiper/hipopigmentáció), a körmök rendellenes elváltozásai (dystrophia) és a nyálkahártya progresszív degeneratív elváltozásai jellemeznek. membránok (leukoplakia) a szájban, és ritkán a végbélnyílás vagy a húgycső. Sok betegnek vannak szemproblémái, beleértve a könnyelvezető csatornák szűkülete miatti könnyezést. További tünetek lehetnek a vörös- és fehérvérsejtek, valamint a vérlemezkék számának csökkenése a vérben (pancitopénia), ami csontvelő-elégtelenséget eredményezhet. Az érintett egyének bőre megvastagodhat a kézfejen és a talpon, a tenyér és a talp túlzott izzadása, ritka vagy hiányzó szőr, törékeny csontok, fejletlen herék és fogászati ​​rendellenességek. Ez a rendellenesség lehet örökletes vagy szórványosan előfordulhat. Az X-hez kötött recesszív a leggyakoribb öröklődési mintázat, de gyakori az autoszomális domináns (mutált génnel rendelkező szülő adja át gyermekének), és az autoszomális recesszív ritka. (Ha többet szeretne tudni erről a rendellenességről, válassza a „dyskeratosis congenita” keresési kifejezést a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    VACTERL asszociáció: születési rendellenességek nem véletlenszerű társulása, amely több szervrendszert érint. A VACTERL kifejezés egy mozaikszó, amelynek minden betűje az érintett gyermekeknél gyakoribb tünetek egyikének első betűje: (V) = csigolya-rendellenességek (A) = anális atresia (C) = szív (szív) rendellenességek (T) = tracheoesophagealis fistula (E) = nyelőcső atresia (R) = vese (vese) rendellenességek (L) = végtag rendellenességek (beleértve a hüvelykujjat és a sugarakat). A fent említett jellemzők mellett az érintett gyermekek ritkábban is mutathatnak rendellenességeket, beleértve a növekedési zavarokat, valamint a súlygyarapodás és a várt ütemben történő növekedés kudarcát (nem boldogulnak). Egyes esetekben a VATER asszociáció mozaikszót használják. A mentális működés és az intelligencia általában nem érinti. A legtöbb eset véletlenszerűen fordul elő, nyilvánvaló ok nélkül (sporadikus). Azonban a FA-betegek legalább 5%-a rendelkezik ezzel az összefüggéssel. (Ha többet szeretne megtudni erről a rendellenességről, válassza a „VACTERL” kifejezést keresési kifejezésként a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    A következő rendellenességek másodlagos szövődményként társulhatnak az FA-hoz. Nem szükségesek a differenciáldiagnózishoz.

    Mielodiszpláziás szindrómák (MDS): a vérbetegségek ritka csoportja, amelyek a csontvelőben lévő vérsejtek nem megfelelő fejlődésének eredményeként jelentkeznek. A vérsejtek három fő típusa (azaz vörösvértestek, fehérvérsejtek és vérlemezkék) érintett. A vörösvérsejtek oxigént szállítanak a szervezetbe, a fehérvérsejtek segítenek a fertőzések leküzdésében, a vérlemezkék pedig a véralvadásban segítik a vérveszteséget. Ezek a nem megfelelően fejlett vérsejtek nem fejlődnek normálisan, és bejutnak a véráramba. Ennek eredményeként az MDS-ben szenvedő egyének vérsejtszintje abnormálisan alacsony (alacsony vérszám). Az MDS-hez kapcsolódó általános tünetek közé tartozik a fáradtság, szédülés, gyengeség, zúzódások és vérzés, gyakori fertőzések és fejfájás. Egyes esetekben az MDS életveszélyes csontvelő-elégtelenséggé fejlődhet, vagy akut leukémiává fejlődhet. Az MDS pontos oka nem ismert. Nincsenek bizonyos környezeti kockázati tényezők. (Ha többet szeretne megtudni erről a rendellenességről, válassza a „myelodysplasiás szindróma” kifejezést keresési kifejezésként a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    Akut mieloid leukémia (AML): a vérrák ritka formája, amely olyan sejtekben kezdődik, amelyek normális esetben bizonyos típusú fehérvérsejtekké fejlődnek. A leukémiába való átmenetet a csontvelő működésének romlása és a fejletlen „éretlen” sejtek, úgynevezett blastok felhalmozódása kíséri, először a csontvelőben, majd a vérben, amelyek elnyomják a fennmaradó csontvelősejt-termelést. Ennek következtében a vérszegénység, a vérzés és a fertőzés szövődményei életveszélyessé válnak. A kóros (leukémiás) sejtek végül a véráramon keresztül eljuthatnak a test más szervrendszereibe. (Ha többet szeretne tudni erről a rendellenességről, válassza az „akut myeloid leukémia” kifejezést keresési kifejezésként a Ritka Betegségek Adatbázisában.)

    Diagnózis

    Az FA diagnózisa alapos klinikai értékelés, részletes betegtörténet, jellemző leletek azonosítása és számos speciális teszt alapján történik.

    A végleges FA-teszt jelenleg egy kromoszómatörési teszt: a páciens vérsejtjeinek egy részét egy kémcsőben olyan vegyszerrel kezelik, amely térhálósítja a DNS-t. A normál sejtek képesek korrigálni a károsodások nagy részét, és nincsenek súlyosan érintettek, míg az FA sejtek jelentős kromoszómatörést mutatnak. Ehhez a teszthez általában két vegyszert használnak: DEB (diepoxibután) és MMC (mitomicin C). Ezeket a teszteket prenatálisan is el lehet végezni a chorionbolyhokból vagy a magzatvízből származó sejteken.

    Vérvizsgálatok végezhetők a vörös- és fehérvérsejtek, valamint a vérlemezkék szintjének meghatározására. A röntgenvizsgálatok feltárhatják a csontrendszeri rendellenességek, belső szerkezeti rendellenességek jelenlétét és mértékét.

    Sok FA-esetet egyáltalán nem, vagy nem diagnosztizálnak időben. Az FA gyanúja és tesztelése minden olyan csecsemőnél, akinél a hüvelykujj és a kar korábban leírt rendellenességei vannak. Bárki, akinél bármilyen életkorban aplasztikus anémia alakul ki, FA-tesztet kell végezni, még akkor is, ha nincs jelen egyéb rendellenesség. Minden olyan betegnél, akinél korán kialakul a fej és a nyak, a gyomor-bélrendszer vagy a nőgyógyászati ​​rendszer laphámsejtes karcinóma, dohányzás vagy alkoholfogyasztással vagy anélkül, FA-tesztet kell végezni. Sok FA-beteg nem mutat más rendellenességet. Alapvető fontosságú az FA tesztelése, mielőtt az aplasztikus anémia vagy a rák kezelésére irányuló őssejt-transzplantációt fontolgatnánk, mivel a standard kemoterápia és sugárkezelés toxikusnak bizonyulhat az FA-ban szenvedő betegek számára.

    A molekuláris genetikai vizsgálat mind a 18 FA-val kapcsolatos génre elérhető. Általában először a komplementációs tesztet végzik el annak megállapítására, hogy melyik FA-gén mutált. A megfelelő gén szekvenciaanalízise ezután elvégezhető az adott gén specifikus mutációjának meghatározására. Ha mutációt nem azonosítanak, klinikailag elérhető a deléciós/duplikációs elemzés az FA-val kapcsolatos génekre.

    A közönséges askenázi zsidók számára elérhető a célzott mutációs elemzés FANCC mutáció.

    Klinikai tesztelés/ Feldolgozás
    Az FA-val diagnosztizált egyén betegségének mértékének megállapításához szükség szerint a következő értékelések javasoltak:

    - A vesék és a húgyutak ultrahangos vizsgálata
    - Hivatalos hallásvizsgálat
    - Fejlesztési értékelés (különösen fontos kisgyermekek és iskoláskorú gyermekek számára)
    - Beutaló szemészhez, fül-orr-gégészhez, endokrinológushoz, kézsebészhez, nőgyógyászhoz (nőknél az indikáció szerint), gasztroenterológushoz, urológushoz, bőrgyógyászhoz, fül-orr-gégészhez, genetikai tanácsadóhoz
    - Hematológus által végzett értékelés, amely tartalmazza a teljes vérképet, a magzati hemoglobint és a csontvelő aspirátumot a sejtmorfológia és a kromoszómavizsgálat (citogenetika), valamint a sejt biopszia céljából
    - Az érintett egyén, a testvérek és a szülők HLA tipizálása a vérképző őssejt-transzplantáció megfontolására
    - Teljes vércsoport
    - Vérkémiai vizsgálatok (máj, vese, pajzsmirigy, lipidek és vas állapotának felmérése)

    Standard terápiák

    Az FA kezelése az egyes egyedeknél jelentkező specifikus tünetekre irányul. A kezeléshez szükség lehet egy szakembercsoport összehangolt erőfeszítésére. A gyermekorvosoknak, sebészeknek, kardiológusoknak, vesespecialistáknak (nefrológusoknak), urológusoknak, gasztroenterológusoknak, hallásproblémákat felmérő és kezelő szakembereknek (audiológusok és fül-orr-gégészek), szemészek és más egészségügyi szakembereknek szisztematikusan és átfogóan meg kell tervezniük az érintett egyén kezelését.

    A kezelésre vonatkozó ajánlásokról egy 2014-es konszenzusos konferencián állapodtak meg.

    -Androgén (férfi hormon) beadása: Az androgének a FA-ban szenvedő betegek körülbelül 50%-ánál javítják a vérképet. A legkorábbi válasz a vörösvértestekben észlelhető, a hemoglobinszint növekedése általában a kezelés első vagy két hónapjában következik be. A fehérvérsejtszámra és a vérlemezkeszámra adott válaszok változóak. A thrombocyta-válasz általában nem teljes, és előfordulhat, hogy néhány hónapos kezelés előtt nem észlelhető. Általában a vörösvértestszám javulása a legnagyobb. A terápiával szembeni rezisztencia idővel kialakulhat.

    -Hematopoietikus növekedési faktorok: A granulocita telep-stimuláló faktor (G-CSF) egyes egyéneknél javíthatja a neutrofilek számát. Rendszerint csak támogatásra használják fellépő betegségek esetén.

    -Hematopoietikus őssejt-transzplantáció (HSCT): az egyetlen gyógyító terápia a FA hematológiai megnyilvánulásaira. A donor őssejtek csontvelőből, perifériás vérből vagy köldökzsinórvérből nyerhetők.

    -Rákkezelés: A rosszindulatú daganatok kezelése másodlagos kihívást jelent a kemoterápiával és a sugárkezeléssel kapcsolatos fokozott toxicitás miatt. Óvatosnak kell lenni a FA-betegek kezelésében jártas központokban.

    Műtétre lehet szükség a csontrendszeri rendellenességek, például a hüvelykujj- és alkarcsontokat érintő rendellenességek, szívhibák és gasztrointesztinális rendellenességek, például tracheoesophagealis fistula vagy nyelőcső atresia, valamint anális atresia kijavításához.

    Bizonyos vegyi anyagok növelhetik a kromoszómatörés kockázatát FA-ban szenvedő egyéneknél, ezért ezeket lehetőség szerint kerülni kell. Ezek a vegyszerek közé tartozik a dohányfüst, formaldehid, gyomirtó szerek és szerves oldószerek, például benzin vagy festékhígító.

    Genetikai tanácsadás javasolt az érintett személyek és családjaik számára.

    Vizsgáló terápiák

    Az aktuális klinikai vizsgálatokkal kapcsolatos információk megtalálhatók az interneten a www.clinicaltrials.gov címen. Az Egyesült Államok kormányzati finanszírozásában részesülő összes tanulmány, és néhány a magánipar által támogatott, megtalálható ezen a kormányzati webhelyen.

    A Bethesdában (MD) található NIH Klinikai Központban folyó klinikai vizsgálatokkal kapcsolatos információkért forduljon az NIH Betegfelvételi Irodájához:

    Ingyenesen hívható: (800) 411-1222
    TTY: (866) 411-1010
    E-mail: [e-mail protected]

    A magánforrások által támogatott klinikai vizsgálatokkal kapcsolatos információkért keresse fel a www.centerwatch.com webhelyet

    Ha többet szeretne megtudni az Európában végzett klinikai vizsgálatokról, vegye fel a kapcsolatot:
    https://www.clinicaltrialsregister.eu/

    Az alábbi források állnak a kutatók rendelkezésére:

    Öröklött csontvelő-elégtelenség szindróma vizsgálat (IBMFSS)
    Nemzeti Rákkutató Intézet
    Telefon: 800-518-8474
    E-mail: [e-mail protected]
    www.marrowfailure.cancer.gov

    FA Cell Repository és az FA Antibody Project
    Fanconi Anemia Research Fund, Inc.
    Oregon Health & Science University
    Orvostudományi Iskola/Humán Genetikai Kezdeményezés
    http://www.ohsu.edu/research/fanconi-anemia/

    NORD Tagszervezetek

      • 1801 Willamette St
      • Lakosztály 200
      • Eugene, OR 97401 USA
      • Telefon: (541) 687-4658
      • Ingyenesen hívható: (800) 828-4891
      • E-mail: [e-mail protected]
      • Weboldal: http://www.fanconi.org/

      Egyéb szervezetek

        • PO Box 38157
        • Toronto
        • Ontario, M5N 3A9 Kanada
        • Telefon: (416) 489-6393
        • E-mail: [e-mail protected]
        • Weboldal: http://www.fanconicanada.org
        • PO Box 905
        • Dél-tenger
        • Hants, PO1 9JG Egyesült Királyság
        • Telefon: 4408452712811
        • E-mail: [e-mail protected]
        • Weboldal: http://www.fanconihope.org
        • PO Box 8126
        • Gaithersburg, MD 20898-8126
        • Telefon: (301) 251-4925
        • Ingyenesen hívható: (888) 205-2311
        • Weboldal: http://rarediseases.info.nih.gov/GARD/
        • Rockefeller Egyetem
        • c/o Arleen Auerbach Ph.D.
        • New York, NY 10021
        • Telefon: (212) 327-8000
        • E-mail: [e-mail protected]
        • Weboldal: http://lab.rockefeller.edu/smogorzewska/ifar/
        • 1900 University Avenue, 101. lakosztály
        • East Palo Alto, CA 94303
        • Telefon: (650) 462-3174
        • E-mail: [e-mail protected]
        • Weboldal: http://www.letthemhear.org
        • P.O. 30105. doboz
        • Bethesda, MD 20892-0105
        • Telefon: (301) 592-8573
        • E-mail: [e-mail protected]
        • Weboldal: http://www.nhlbi.nih.gov/

        Hivatkozások

        TANKÖNYVEK
        Változtasd meg a vérnyomást. Fanconi vérszegénység. NORD útmutató a ritka betegségekhez. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins 2003:366.

        Vásároljon ML-t. Főszerkesztő. Születési rendellenességek enciklopédiája. Dover, MA: Blackwell Scientific Publications. Center for Birth Defects Information Services, Inc. 1990:1359-61,1784.

        FOLYÓIRATCIKKEK
        Ebens CL, MacMillan ML, Wagner JE. Hematopoietikus sejttranszplantáció Fanconi vérszegénységben: jelenlegi bizonyítékok, kihívások és ajánlások. Szakértő Rev Hematol. 2017. január 10. (1):81-97. doi: 10.1080/17474086.2016.1268048.

        Schneider M, Chandler K, Tischkowitz M, Meyer S. Fanconi anémia: genetika, molekuláris biológia és rák – a klinikai kezelés következményei gyermekeknél és felnőtteknél. Clin Genet. 2015. július 88(1):13-24. doi: 10.1111/cge.12517.

        Triemstra J, Pham A, Rhodes L, Wagoner DJ, Onel K. A Review of Fanconi anaemia for the Practicing Pediatrician. Pediatr Ann. 2015. október 44(10):444-5, 448, 450 passim. doi: 10.3928/00904481-20151012-11.

        Khincha PP, Savage SA. Az öröklött csontvelő-elégtelenség szindrómák genomikai jellemzése. Semin Hematol. 2013. október 50. (4):333-47. doi: 10.1053/j.seminhematol.2013.09.002.

        Kee Y, D’Andrea AD. A Fanconi-vérszegénység molekuláris patogenezise és klinikai kezelése. J Clin Invest. 2012. nov.122(11):3799-806. doi: 10.1172/JCI58321.

        Tolar J, Becker PS, Clapp DW, Hanenberg H, de Heredia CD, Kiem HP, Navarro S, Qasba P, Rio P, Schmidt M, Sevilla J, Verhoeyen E, Thrasher AJ, Bueren J. Génterápia Fanconi anémiára: egy lépj közelebb a klinikához. Hum Gene Ther. 2012. február 23. (2):141-4. doi: 10.1089/hum.2011.237.

        Rosenberg PS, Tamary H, Alter BP. Milyen magas a ritka recesszív szindrómák hordozófrekvenciája? A Fanconi-vérszegénység becslései az Egyesült Államokban és Izraelben. American Journal of Medical Genetics A. rész, 2011155:1877-1883.

        Alter BP, Giri N, Savage SA, Peters JA, Loud JT, Leathwood L, Carr A, Greene MH, Rosenberg PS. Rosszindulatú daganatok és túlélési minták a National Cancer Institute Öröklött csontvelő-elégtelenség szindrómák kohorszvizsgálatában. British Journal of Hematology. 2010150:179-188.

        Shimamura A, Alter BP. Az öröklött csontvelő-elégtelenség szindrómák kórélettana és kezelése. Vér vélemények. 201024:101-122.

        moldovai G-L és D’Andrea AD. Hogyan őrzi a genomot a Fanconi vérszegénység-útvonal? Genetika éves áttekintése. 200943: 223-249.

        Taniguchi T, D'Andrea AD. A Fanconi vérszegénység molekuláris patogenezise: közelmúltbeli fejlődés. Vér. 2006107:4223-3.

        Bagby GC, Lipton JM, Sloand EM, Schiffer CA. Velő kudarca. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2004318-36.

        Bagby GC. A Fanconi-vérszegénység genetikai alapja. Curr Opin Hematol. 200310:1:68-76.

        D’Andrea AD, Grompe M. The Fanconi anaemia/BRCA pathway. Nat Rev Rák. 2003:3:23-34.

        Meetei AR, de Winter JP, Medhurst AL és munkatársai, Egy új ubiquitin ligáz hiányos Fanconi anémiában. Nat Genet. 200335:165-70.

        Tischkowitz MD, Hodgson SV. Fanconi vérszegénység. J Med Genet. 200340:1-10.

        Joenje H, Patel KJ. A Fanconi-anémia kialakulóban lévő genetikai és molekuláris alapja. Nat Rev Genet. 20012:446-57.

        INTERNET
        Mehta PA, Tolar J. Fanconi vérszegénység. 2002. február 14. [Frissítve: 2018. március 8.]. In: Adam MP, Ardinger HH, Pagon RA, et al., szerkesztők. GeneReviews® [Internet]. Seattle (WA): Washingtoni Egyetem, Seattle 1993-2020. Elérhető: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1401/ Hozzáférés: 2020. május 4.

        Frohnmayer D, Frohnmayer L, Guinan E, Kennedy T, Larsen K, szerkesztők. Fanconi Anemia: Guidelines for Diagnosis and Management, 4. kiadás, 2014. Fanconi Anemia Research Fund, Inc. Elérhető: https://www.fanconi.org/images/uploads/other/Guidelines_4th_Edition.pdf Hozzáférés: 2020. május 4.

        Moustacchi E. Fanconi Vérszegénység. Orphanet. Utolsó frissítés: 2011. november. https://www.orpha.net/consor/cgi-bin/OC_Exp.php?Expert=84 Hozzáférés: 2020. május 4.

        Országos Egészségügyi Intézetek. Mi az a Fanconi vérszegénység? Utolsó frissítés: 2011. november 1. https://www.nhlbi.nih.gov/health-topics/fanconi-anemia Hozzáférés: 2020. május 4.

        Megjelenés évei

        A NORD&rsquos Ritka Betegségek Adatbázisában található információk csak oktatási célokat szolgálnak, és nem helyettesítik az orvos vagy más szakképzett egészségügyi szakember tanácsát.

        A Ritka Betegségek Országos Szervezete (NORD) weboldalának és adatbázisainak tartalma szerzői jogvédelem alatt áll, és a NORD előzetes írásbeli engedélye és jóváhagyása nélkül semmilyen módon, kereskedelmi vagy nyilvános célra nem reprodukálható, másolható, letölthető vagy terjeszthető. . Magánszemélyek nyomtathatnak egy nyomtatott példányt egy adott betegségről személyes használatra, feltéve, hogy a tartalom nem módosítható, és a NORD&rsquos szerzői jogát tartalmazza.

        Ritka Betegségek Nemzeti Szervezete (NORD)
        55 Kenosia Ave., Danbury CT 06810 &bull (203)744-0100


        Hivatkozások

        Zhang, J., Campbell, R. E., Ting, A. Y. és Tsien, R. Y. Új fluoreszcens próbák létrehozása sejtbiológiához. Nature Rev. Mol. Cell Biol. 3, 906?918 (2002).

        Jares-Erijman, E. A. és Jovin, T. M. FRET képalkotás. Nature Biotechnol. 21, 1387?1395 (2003).

        Miyawaki, A. Az intracelluláris jelátvitel térbeli és időbeli dinamikájának megjelenítése. Dev. Sejt 4, 295?305 (2003).

        Hu, C. D., Chinenov, Y. és Kerppola, T. K. A bZIP és a Rel család fehérjéi közötti kölcsönhatások megjelenítése élő sejtekben bimolekuláris fluoreszcens komplementáció segítségével. Mol. Sejt 9, 789?798 (2002).

        Hu, C. D. és Kerppola, T. K. Több fehérje kölcsönhatás egyidejű megjelenítése élő sejtekben többszínű fluoreszcencia komplementációs analízis segítségével. Nature Biotechnol. 21, 539?545 (2003).

        Brock, R. és Jovin, T. M.Fluoreszcencia korrelációs mikroszkópia (FCM)-fluoreszcencia korrelációs spektroszkópia (FCS) a sejtbe bevéve. Sejt. Mol. Biol. 44, 847?856 (1998).

        Zhang, S. F., Ma, C. és Chalfie, M. Sejtek és organellumok kombinatorikus jelölése rekonstituált fluoreszcens fehérjékkel. Sejt 119, 137?144 (2004).

        Cabantous, S., Terwilliger, T. C. és Waldo, G. S. Protein tagging and detection with engineered self-assembling fragments of green fluorescent protein. Nature Biotechnol. 23, 102?107 (2005).

        Deppmann, C. D., Thornton, T. M., Utama, F. E. és Taparowsky, E. J. A BATF foszforilációja szabályozza a DNS-kötést: új mechanizmus az AP-1 (aktivátor fehérje-1) szabályozására. Biochem. J. 374, 423?431 (2003).

        Grinberg, A. V., Hu, C. D. és Kerppola, T. K. Myc/Max/Mad család dimereinek megjelenítése és a dimerizációért való versengés élő sejtekben. Mol. Sejt. Biol. 24, 4294?4308 (2004).

        Rajaram, N. és Kerppola, T. K. A Maf és Sox általi szinergikus transzkripció aktiválását és szubnukleáris lokalizációját megzavarta a Maf-ben egy szürkehályogot okozó mutáció. Mol. Sejt. Biol. 24, 5694?5709 (2004).

        Zhu, L. Q. et al. A Mist1 homodimer képződésének gátlása hasnyálmirigy acináris-duktális metapláziát indukál. Mol. Sejt. Biol. 24, 2673?2681 (2004).

        Kanno, T. et al. Az acetilezett hisztonok szelektív felismerése élő sejtekben látható bromodomén fehérjék által. Mol. Sejt 13, 33?43 (2004).

        Farina, A. et al. A Brd4 bromodomén fehérje kötődik a GTPáz-aktiváló SPA-1-hez, modulálja annak aktivitását és szubcelluláris lokalizációját. Mol. Sejt. Biol. 24, 9059?9069 (2004).

        Diaz, I., Martinez, M., Isabel-LaMoneda, I., Rubio-Somoza, I. és Carbonero, P. A DOF fehérje, a SAD, kölcsönhatásba lép a GAMYB-vel a növényi magokban, és aktiválja az endospermium-specifikus gének transzkripcióját az árpa során magfejlődés. J. növény. 42, 652?662 (2005).

        Jang, M. K. et al. A Brd4 bromodomén fehérje a P-TEFb pozitív szabályozó komponense, és stimulálja az RNS-polimeráz II-függő transzkripciót. Mol. Sejt. 19, 523?534 (2005).

        Laricchia-Robbio, L. et al. Az IFN szabályozó 8-as faktor partner által szabályozott kölcsönhatása élő makrofágokban látható kromatinnal. Proc. Natl Acad. Sci. USA 102, 14368?14373 (2005).

        von der Lehr, N. et al. Az F-Box Skp2 fehérje részt vesz a c-Myc proteoszómális lebontásában, és kofaktorként működik a c-Myc által szabályozott transzkripcióban. Mol. Sejt. 11, 1189?1200 (2003).

        de Virgilio, M., Kiosses, W. B. és Shattil, S. J. Proximális, szelektív és dinamikus kölcsönhatások az αIIbβ3 integrin és a protein tirozin kinázok között élő sejtekben. J. Cell Biol. 165, 305?311 (2004).

        Blondel, M. et al. A Hof1 SCFGrr1 általi lebontása fontos az aktomiozin összehúzódásához az élesztőben a citokinézis során. EMBO J. 24, 1440?1452 (2005).

        Niu, T. K., Pfeifer, A. C., Lippincott-Schwartz, J. és Jackson, C. L. Dynamics of GBF1, a brefeldin A-szenzitív Arf1 cserefaktor a Golginál. Mol. Biol. Sejt 16, 1213?1222 (2005).

        Remy, I., Montmarquette, A. & Michnick, S. W. A PKB/Akt modulálja a TGF-β jelátvitelt a Smad3-mal való közvetlen kölcsönhatáson keresztül. Nature Cell Biol. 6, 358?365 (2004).

        Stolpe, T. et al. In planta a fényjelzéssel kapcsolatos fehérje-fehérje kölcsönhatások elemzése bimolekuláris fluoreszcens komplementációval. Protoplazma 226, 137?146 (2005).

        Hynes, TR, Mervine, SM, Yost, EA, Sabo, JL és Berlot, CH A Gs és a β2-adrenerg receptor élő sejtes képalkotása azt mutatja, hogy mind az αs, mind a β1γ7 internalizálódik a stimuláció hatására, és hasonló forgalmi mintákat mutat, amelyek különböznek a β2-adrenerg receptor. J. Biol. Chem. 279, 44101?44112 (2004).

        Guo, Y. J., Rebecchi, M. és Scarlata, S. A foszfolipáz C β2 kötődik a C δ1 foszfolipázhoz és gátolja azt. J. Biol. Chem. 280, 1438?1447 (2005).

        Ozalp, C., Szczesna-Skorupa, E. és Kemper, B. Citokróm P450 2C2, 2E1 és NADPH-citokróm P450 reduktáz molekuláris kölcsönhatásainak bimolekuláris fluoreszcens komplementációs analízise élő sejtekben. Drug Metab. Dispos. 33, 1382?1390 (2005).

        Giese, B. et al. A gp130 és LIFR citokin receptorok dimerizációja egyedi sejtekben elemezve. J. Cell Sci. 118, 5129?5140 (2005).

        Hynes, T. R. et al. A G-protein βγ dimereinek megjelenítése bimolekuláris fluoreszcens komplementáció segítségével mind a β, mind a γ szerepét mutatja a szubcelluláris célzásban. J. Biol. Chem. 279, 30279?30286 (2004).

        Takahashi, Y. et al. A Bif-1 elvesztése elnyomja a Bax/Bak konformációs változást és a mitokondriális apoptózist. Mol. Sejt. Biol. 25, 9369?9382 (2005).

        Nyfeler, B., Michnick, S. W. és Hauri, H. P. Fehérjekölcsönhatások rögzítése élő sejtek szekréciós útvonalában. Proc. Natl Acad. Sci. USA 102, 6350?6355 (2005).

        Rackham, O. és Brown, C. M. RNS-protein interakciók megjelenítése élő sejtekben: Az FMRP és az IMP1 kölcsönhatásba lép az mRNS-eken. EMBO J. 23, 3346?3355 (2004).

        Stains, C. I., Porter, J. R., Ooi, A. T., Segal, D. J. és Ghosh, I. A zöld fluoreszcens fehérje DNS-szekvencia-képes reassemblya. J. Am. Chem. Soc. 127, 10782?10783 (2005).

        Remy, I. & Michnick, S. W. Apoptózis szabályozása az Ft1 fehérje által, a protein kinase B/Akt új modulátora. Mol. Sejt. Biol. 24, 1493?1504 (2004).

        Shyu, Y. J., Liu, H., Deng, X. & Hu, C. D. Új fluoreszcens fehérje fragmentumok azonosítása bimolekuláris fluoreszcens komplementációs analízishez fiziológiás körülmények között. BioTechniques 40, 61?66 (2006).

        Fang, D. Y. és Kerppola, T. K. Az ubiquitin által közvetített fluoreszcens komplementáció feltárja, hogy az Itch/AIP4 által ubiquitinált Jun a lizoszómákban lokalizálódik. Proc. Natl Acad. Sci. USA 101, 14782?14787 (2004).

        Magliery, T. J. et al. Fehérje-fehérje kölcsönhatások kimutatása zöld fluoreszcens fehérjefragmens-visszaszerelő csapdával: terjedelem és mechanizmus. J. Am. Chem. Soc. 127, 146?157 (2005).

        Richards, F. M. A szubtilizinnel módosított ribonukleáz enzimaktivitásáról. Proc. Natl Acad. Sci. USA 44, 162?166 (1958).

        Ullmann, A., Perrin, D., Jacob, F. és Monod, J. Identification par complémentation in vitro et purification d'un segment peptidique de la β-galactosidase d' Escherichia coli. J. Mol. Biol. 12, 918?923. (1965).

        Rossi, F., Charlton, C. A. és Blau, H. M. A protein-protein interakciók monitorozása intakt eukarióta sejtekben β-galaktozidáz komplementációval. Proc. Natl Acad.Sci. USA 94, 8405?8410 (1997).

        Johnsson, N. & Varshavsky, A. A hasított ubiquitin mint fehérjekölcsönhatások érzékelője in vivo. Proc. Natl Acad. Sci. USA 91, 10340?10344 (1994).

        Pelletier, J. N., Campbell-Valois, F. X. & Michnick, S. W. Aktív dihidrofolát-reduktáz oligomerizációs domén-irányított újraösszeállítása racionálisan megtervezett fragmentumokból. Proc. Natl Acad. Sci. USA 95, 12141?12146 (1998).

        Ghosh, I., A. D. Hamilton és L. Regan. Antiparallel leucin cipzárral irányított fehérje összeszerelés: felvitel a zöld fluoreszcens fehérjére. J. Am. Chem. Soc 122, 5658?5659 (2000).

        Hoff, B. és Kuck, U. Bimolekuláris fluoreszcens komplementáció alkalmazása a fonalas gombából származó élő sejtek magjaiban lévő transzkripciós faktor kölcsönhatás bemutatására Acremonium chrysogenum. Curr. Közönséges petymeg. 47, 132?138 (2005).

        Atmakuri, K., Ding, Z. Y. és Christie, P. J. A VirE2, egy IV-es típusú szekréciós szubsztrát, kölcsönhatásba lép a VirD4 transzfer fehérjével a sejtpólusokon Agrobacterium tumefaciens A1. Mol. Microbiol. 49, 1699?1713 (2003).

        Tzfira, T., Vaidya, M. és Citovsky, V. Célzott proteolízis bevonása növényi genetikai transzformációba Agrobacterium. Természet 431, 87?92 (2004).

        Loyter, A. et al. A növényi VirE2 kölcsönhatásba lépő fehérje 1. A molekuláris kapcsolat a Agrobacterium T-komplex és a gazdasejt kromatinja? Plant Physiol. 138, 1318?1321 (2005).

        Lacroix, B., Vaidya, M., Tzfira, T. & Citovsky, V. The VirE3 protein of Agrobacterium utánozza a növényi genetikai transzformációhoz szükséges gazdasejt funkciót. EMBO J. 24, 428?437 (2005).

        Schmidt, C. et al. A proinflammatorikus citokin-indukált kétfázisú NF-κB aktiváció mechanizmusai. Mol. Sejt. 12, 1287?1300 (2003).

        Blumenstein, A. et al. Az Aspergillus nidulans A fitokróm FphA vörös fényben elnyomja a szexuális fejlődést. Curr. Biol. 15, 1833?1838 (2005).

        Tsuchisaka, A. & Theologis, A. Heterodimer kölcsönhatások az 1-amino-ciklopropán-1-karboxilát szintáz polipeptidek között, amelyeket a Arabidopsis géncsalád. Proc. Natl Acad. Sci. USA 101, 2275?2280 (2004).

        Ye, H. H., Choi, H. J., Poe, J. és Smithgall, T. E. Oligomerizáció szükséges az Src család protein-tirozin kinázának, Hck HIV-1 nef által kiváltott aktiválásához. Biokémia 43, 15775?15784 (2004).

        Bracha-Drori, K. et al. Fehérje-fehérje kölcsönhatások kimutatása növényekben bimolekuláris fluoreszcens komplementáció segítségével. J. növény. 40, 419?427 (2004).

        Walter, M. et al. Fehérje kölcsönhatások megjelenítése élő növényi sejtekben bimolekuláris fluoreszcens komplementáció segítségével. J. növény. 40, 428?438 (2004).

        Hackbusch, J., Richter, K., Muller, J., Salamini, F. és Uhrig, J. F. A központi szerep Arabidopsis thaliana tojásfehérjék a 3 aminosavból álló hurokhosszabbítású homeodomén fehérjék hálózatba szerveződésében és szubcelluláris lokalizációjában. Proc. Natl Acad. Sci. USA 102, 4908?4912 (2005).

        Shimizu, H. et al. A LIP19, egy alaprégió leucin cipzár fehérje, egy fos-szerű molekuláris kapcsoló a rizsnövények hidegjelzésében. Plant Cell Physiol. 46, 1623?1634 (2005).

        Abe, M. et al. FD, egy bZIP fehérje, amely az FT virágút-integrátor jeleit közvetíti a hajtáscsúcson. Tudomány 309, 1052?1056 (2005).

        Maple, J., Aldridge, C. és Moller, S. G. A plasztidosztódást a plasztidosztódási fehérjék kombinatorikus összeállítása közvetíti. J. növény. 43, 811?823 (2005).

        Demidov, V. V. et al. A DNS-hibridizáció által kiváltott hasított fluoreszcens fehérje gyors komplementációja. Proc. Natl Acad. Sci. USA 103, 2052?2056 (2006).

        Schmidt, U., Richter, K., Berger, A. B. és Lichter, P. In vivo Y14 és NXF1 mRNS export komplexek BiFC elemzése: preferenciális lokalizáció az SC35 doméneken belül és azok körül. J. Cell Biol. 172, 373?381 (2006).

        Cascales, E., Atmakuri, K., Liu, Z., Binns, A. N. és Christie, P. J. Agrobacterium tumefaciens onkogén szuppresszorok gátolják a T-DNS és a VirE2 fehérje szubsztrát kötődését a VirD4 kapcsoló fehérjéhez. Mol. Microbiol. 58, 565?579 (2005).


        Nézd meg a videót: : Falus András A gének három csoportjáról (Június 2022).


Hozzászólások:

  1. Lany

    I have to admit, the webmaster did a good job.

  2. Cunningham

    In my opinion, this is a delusion.

  3. Bodil

    cool ... it was interesting to read

  4. Leopoldo

    Bizalomban azt mondta, hogy véleményem ezután nyilvánvaló. Javaslom, hogy keresse meg a google.com -ot

  5. Norberto

    megbolondul !!! Afftaru Zachot!

  6. Gojas

    A bejegyzés arra késztette, hogy * sokat gondolkodjak * ...

  7. Michio

    Thank you huge, how can I thank you?



Írj egy üzenetet